LPS刺激對(duì)雛雞氣管和肺TLR4表達(dá)的影響研究.pdf

1、呼吸系統(tǒng)在機(jī)體內(nèi)不僅起到氣體交換的作用，同時(shí)由于該系統(tǒng)相對(duì)開放的特點(diǎn)，在機(jī)體中也發(fā)揮著免疫防御的作用。外源性抗原侵入機(jī)體時(shí)，首先啟動(dòng)天然免疫系統(tǒng)，通過模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs）對(duì)抗原進(jìn)行識(shí)別，引起一系列免疫反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)病原菌或外來抗原的防御作用。Toll樣受體(tolllikereceptors，TLRs)是一類廣泛存在于多種組織器官中的模式識(shí)別受體，在天然免疫和獲得性免疫中起到

2、了連接作用。TLR4被認(rèn)為在對(duì)抗革蘭氏陰性菌中發(fā)揮著重要作用。禽類中細(xì)菌性呼吸性疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，但是關(guān)于TLR4在雞呼吸系統(tǒng)免疫反應(yīng)中的作用的研究報(bào)道還比較少。因此本項(xiàng)目擬以雞為研究對(duì)象，采用免疫組織化學(xué)染色、細(xì)胞特異性染色、ELISA等方法探究雛雞受到LPS刺激后，氣管和肺的組織學(xué)變化和TLR4在氣管和肺中的分布及表達(dá)變化，以此來探討LPS刺激對(duì)家禽呼吸系統(tǒng)的影響及TLR4在呼吸性疾病中的作用。主要研究結(jié)果如下:
　

3、　1、LPS刺激對(duì)雞氣管組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響
　　光鏡下觀察，雞氣管黏膜層分為上皮和固有層:上皮為假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮，主要有纖毛柱狀細(xì)胞和杯狀細(xì)胞，二者相互夾雜著分布;雛雞黏膜下層的氣管腺在對(duì)照組和LPS組中都很少;1周齡內(nèi)的雛雞氣管的透明軟骨環(huán)呈不完整的圓片狀，在軟骨片交接處經(jīng)常見到兩層軟骨。LPS刺激36h和72h時(shí)，部分上皮細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞之間的分界模糊，有些柱狀細(xì)胞纖毛脫落;氣管上皮的杯狀細(xì)胞數(shù)量從刺激后12h開始減少，36

4、h和72h比12h稍有增加，但仍然少于對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)果說明，腹腔注射LPS可以導(dǎo)致氣管發(fā)生損傷。
　　2、LPS刺激對(duì)雞氣管中TLR4表達(dá)分布的影響
　　通過免疫組織化學(xué)染色的方法研究TLR4在雛雞氣管中的表達(dá)分布，結(jié)果顯示在對(duì)照組和LPS組中均有TLR4陽(yáng)性產(chǎn)物分布，且主要在纖毛柱狀細(xì)胞的纖毛上表達(dá)，上皮杯狀細(xì)胞中不表達(dá)TLR4，在固有層和黏膜下層中也可見棕黃色的TLR4陽(yáng)性產(chǎn)物。LPS刺激后，TLR4在雛雞氣

5、管中的表達(dá)升高，且在刺激后36h到達(dá)高峰，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。TLR4在LPS刺激前后的表達(dá)變化提示在受到病原菌入侵時(shí)，氣管上皮細(xì)胞可能通過TLR4對(duì)其發(fā)揮作用。
　　3、LPS刺激對(duì)雞肺組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響
　　光鏡下觀察，雛雞肺由許多肺小葉組成，小葉與小葉之間為結(jié)締組織。三級(jí)支氣管管腔在肺小葉中央，管腔周圍是肺房的開口，開口處有平滑肌束;肺房呈囊腔狀，上皮為單層扁平上皮，細(xì)胞外有彈性纖維;肺毛細(xì)管上皮是單層扁平上

6、皮，細(xì)胞外有網(wǎng)狀纖維和毛細(xì)血管。LPS刺激后12h和36h，部分肺小葉之間界限模糊，肺房管腔變狹窄，甚至減少，肺毛細(xì)管充盈，細(xì)胞受擠壓而密集，肺組織淤血，在某些三級(jí)支氣管管腔、肺房、肺毛細(xì)管和血管中均有大量紅細(xì)胞分布，肺間質(zhì)中散在分布有白細(xì)胞;LPS刺激后72h，肺的組織學(xué)結(jié)構(gòu)比前兩組有所好轉(zhuǎn)，但在三級(jí)支氣管管腔中仍有紅細(xì)胞分布，肺小葉結(jié)構(gòu)凌亂。該結(jié)果說明腹腔注射LPS可引起肺發(fā)生損傷和炎癥。
　　4、LPS刺激對(duì)雞肺中TLR4表

7、達(dá)分布的影響
　　通過免疫組織化學(xué)染色的方法研究了TLR4在雛雞肺中的表達(dá)分布，結(jié)果顯示TLR4在對(duì)照組和刺激組雛雞的肺中均有分布。陽(yáng)性細(xì)胞主要表達(dá)在肺間質(zhì)和血管中的細(xì)胞。通過連續(xù)切片進(jìn)行HE染色、Schiff-亞甲藍(lán)染色和免疫組化染色可以發(fā)現(xiàn)TLR4表達(dá)為陽(yáng)性的細(xì)胞，可能為漿細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或異嗜性粒細(xì)胞。LPS刺激12h和36h，肺TLR4的表達(dá)升高，72h時(shí)TLR4表達(dá)降低，且與12h和36h相比差異顯著(

8、P＜0.05)。TLR4在肺中的表達(dá)分布提示，受到病原菌刺激后，肺可能通過巨噬細(xì)胞、異嗜性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞上的TLR4介導(dǎo)活化細(xì)胞，引起炎癥反應(yīng)等，對(duì)侵入機(jī)體的病原菌起到防御作用。
　　5、LPS刺激對(duì)雞氣管和肺中SIgA表達(dá)變化的影響
　　ELISA結(jié)果顯示，黏膜免疫的主要效應(yīng)因子分泌型IgA(SIgA)在雛雞氣管中的表達(dá)隨著LPS刺激時(shí)間的延長(zhǎng)先升高后逐漸降低，12h表達(dá)量最高，72h時(shí)表達(dá)最低。在雛雞肺中隨著刺激時(shí)間的