版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、從脊椎動物到無脊椎動物,Hh信號通路廣泛存在并高度保守,在動物胚胎多種組織器官的發(fā)育中發(fā)揮重要作用。Hh信號通路在不同的靶細胞中發(fā)揮著不同的作用。Hh以及它下游信號分子的變異與多種癌癥等疾病的發(fā)生有關。因此,研究Hh信號通路的轉導機制對于了解動物體的生長發(fā)育機制以及某些疾病的發(fā)生都有著重要意義。近年來,越來越多的研究表明,Hh信號通路能夠調控動物脂肪細胞的生長發(fā)育,至于它在不同物種中的調控作用是否一致尚有爭議。
作為一種重要的
2、經(jīng)濟昆蟲,家蠶不僅是鱗翅目昆蟲的典型模式生物,同時也是開發(fā)新一代生物反應器的重要材料。脂肪體是家蠶體內重要的組織器官,它既是糖類、脂類和蛋白質等物質的合成和代謝中心,還具有貯存營養(yǎng)、解毒以及為生命周期活動提供各種生物合成的代謝產(chǎn)物等生理功能。家蠶脂肪體遍布其整個體腔,具有類似哺乳動物肝臟和腎臟的功能。脂肪體內貯存物質豐富與否與幼蟲生長發(fā)育及變態(tài)、成蟲產(chǎn)卵量和卵質量好壞都有密切關系。因此,本文主要研究Hh信號通路對于家蠶脂肪細胞分化發(fā)育的
3、調控作用。
本研究所涉及到的基因包括:Ⅰ.Hedgehog信號通路的組成基因:分泌蛋白Hh、受體Ptch和Smo、下游轉錄因子Ci以及Fu、Cos2。Ⅱ.脂肪酸結合蛋白AP2,它主要在脂肪細胞中作為脂質伴侶而表達,它的表達量能夠在一定程度上表明脂肪的含量。
本研究包括以下五部分內容:
(1).克隆并鑒定家蠶Hh信號通路的組成基因(Hh、Ptch、Smo、Ci、Fu、 Cos2)以及脂肪標記基因AP2。對Hh
4、進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn),家蠶Hh蛋白與其它物種(如斑馬魚、果蠅、小鼠和人等)Hh蛋白的氨基酸序列均高度相似,證明了Hh蛋白是一種比較保守的蛋白質。
(2).Hh信號通路在家蠶幼蟲不同生長時期和不同組織中的表達情況分析。通過實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),Hh信號通路在家蠶幼蟲不同生長時期活性不同,其中胚胎期活性最高,隨著幼蟲生長其活性逐漸降低,這表明Hh信號通路主要在家蠶胚胎期起作用。同時,在家蠶不同組織的檢測表明,Hh信號通路在
5、新陳代謝旺盛的組織中活性較高,如絲腺、脂肪體和性腺等。此外,通過對家蠶幼蟲三個不同時期(五齡第1天、熟蠶、蛹)脂肪體中Hh信號通路活性的檢測,發(fā)現(xiàn)Hh信號通路在家蠶脂肪體快速生長或解離的時期如五齡初期、蛹期活性很高,而在其沒有明顯變化的時期如熟蠶期活性較低,說明Hh信號通路在家蠶脂肪形成中起著重要作用。
(3).在BmN細胞系中進行Hh基因的過表達和干擾實驗,來檢測Hh基因對該通路下游基因以及脂肪標記基因AP2的調控。利用改良
6、后的piggyBac轉座載體將外源Hh基因插入BmN細胞基因組中,篩選鑒定后得到穩(wěn)定的Hh過表達轉基因細胞系。同時,體外合成dsRNA轉染BmN細胞來抑制Hh基因的表達。對比Hh過表達和RNAi結果,發(fā)現(xiàn)在Hh信號通路中,Smo、Ci、Fu為正調控因子,Ptch和Cos2為負調控因子,并且Hh信號通路抑制AP2基因的表達。
(4).藥物處理—體外實驗。利用環(huán)杷明(Hh通路特異性拮抗劑)處理家蠶體外原代培養(yǎng)脂肪細胞。結果表明:環(huán)
7、杷明抑制家蠶體外培養(yǎng)脂肪細胞中Hh信號通路的表達,促進AP2的表達;觀察脂肪細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明處理明顯加快脂肪細胞的分化。說明在家蠶體外培養(yǎng)脂肪細胞中,Hh信號通路受到抑制會促進脂肪細胞的分化。
(5).藥物處理—體內實驗。四齡起家蠶幼蟲每天添食一定量的環(huán)杷明,三天后取脂肪體進行實時熒光定量PCR檢測,發(fā)現(xiàn)Hh信號通路表達水平受到抑制。連續(xù)添食至五齡第1天,取幼蟲脂肪體做石蠟切片觀察脂肪細胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)環(huán)杷明處理明顯促進家蠶幼蟲
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Sonic Hedgehog信號通路調控小鼠肺發(fā)育機制的研究.pdf
- 家蠶中腸上皮細胞分化調控相關信號通路及其基因表達的研究.pdf
- Shh信號通路調控大鼠MSCs分化為神經(jīng)細胞機制的研究.pdf
- 從Hedgehog信號傳導通路角度研究HSC對MSC的調控機制.pdf
- Notch信號通路調控人脂肪間充質干細胞向內皮細胞分化的研究.pdf
- Hedgehog信號調控杯狀細胞化生的效應和機制研究.pdf
- Hedgehog信號通路調控Twist1表達促進肝癌細胞侵襲轉移分子機制研究.pdf
- 調控成骨細胞分化的信號轉導通路研究.pdf
- Wnt與Notch信號通路調控造血發(fā)育機制研究.pdf
- Bm Antp基因對家蠶翅發(fā)育調控的安步研究.pdf
- Wnt-β-Catenin信號通路和Hippo信號通路在果蠅器官發(fā)育中新的調控機制研究.pdf
- Hedgehog信號通路促進乳腺癌細胞轉移及其分子機制研究.pdf
- 胰腺癌中Hedgehog信號通路調控RegIV的相關研究.pdf
- Wnt信號通路介導的基因調控毛囊干細胞定向分化的研究.pdf
- 牛PPARγ基因調控脂肪細胞增殖和分化的機制研究.pdf
- Hedgehog信號通路介導血管周細胞參與腎間質纖維化的機制研究.pdf
- 抑制Hedgehog信號通路對小鼠胚胎間充質干細胞成脂分化的影響.pdf
- LKB1通過AMPK-mTOR信號通路調節(jié)脂肪細胞分化的分子機制研究.pdf
- 純鈦表面WNT信號通路調控BMSCs成骨分化的機制研究.pdf
- 炎癥微環(huán)境影響下Wnt信號通路對牙周膜干細胞骨向分化的調控機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論