小麥EST—SSR圖譜構(gòu)建及抗白粉病基因Pm16的SSR標記研究.pdf

1、該論文主要包括小麥中來源于表達序列標簽的微衛(wèi)星標記(EST-SSR)圖譜的構(gòu)建,及小麥抗白粉病基因Pml6的SSR標記鑒定和定位兩部分.基于國際小麥作圖群體Opata85×W7984親本組合的F<,7>代重組近交系群體,利用國際公共數(shù)據(jù)庫GeneBank中的小麥ESTs序列開發(fā)并設(shè)計EST-SSRs引物,通過Mapmaker軟件將在作圖群體間表現(xiàn)多態(tài)性的EST-SSR標記位點整合在已知小麥的6個染色體RFLP圖譜上,加密了原遺傳連鎖圖譜

2、的分子標記密度.Pml6最初被定位在4A上,為了能有效利用抗性基因,該研究通過小麥近等基因系Pml6/北京837<'*>7,及Pml6/遼10親本組合的兩個抗感分離群體的研究,發(fā)現(xiàn)了一對與抗白粉病基因Pml6緊密連鎖的SSR標記,利用該標記將Pml6基因重新定位于小麥5B染色體上.主要內(nèi)容包括:1.分析國際公共數(shù)據(jù)庫中dbEST中的EST序列,從中篩選出包含SSRs的ESTs序列,用Primer3軟件設(shè)計EST-SSR引物150對,再通

3、過PCR擴增和聚丙烯酰胺凝膠電泳,對引物的退火溫度、擴增片斷大小、擴增產(chǎn)物特異性、背景深淺等特性進行了統(tǒng)計、分析.2.用Opata85和W7984親本材料,從150個EST-SSRs引物中篩選出多態(tài)性引物15個;利用其F<,7>代重組近交系114株單株材料進行檢測,通過軟件作圖將其分別定位在小麥第2、4、6染色體群上.3.對這些定位的EST-SSR序列在國際公共數(shù)據(jù)庫中進行進行同源性比對和功能預測,發(fā)現(xiàn)有9個包含SSR的ESTs與某些功

4、能基因序列具有很高的同源性.4.為了給Pml6找到連鎖標記,用44對已定位于4A和5B染色體上的小麥微衛(wèi)星引物對雜交組合Pml6/北京837*7的101株F2抗感分離群體進行SSR位點檢測,結(jié)果篩選出2對SSR引物Xgwm335和Xgwm213的擴增產(chǎn)物在抗感個體間存在多態(tài)性.進一步分析表明,其與抗病基因Pml6連鎖,遺傳距離都約為24cM.5.為了尋找新的標記,另一個組合Pml6/遼10的分離后代F2的28個單株再次用來檢測與Pml6