小麥抗白粉病基因Pm6的分子標(biāo)記篩選及定位.pdf

1、小麥抗白粉病基因Pm6的分子標(biāo)記篩選及定位分子標(biāo)記技術(shù)是二十世紀(jì)80年代中期建立起來(lái)的，它是一種以遺傳物質(zhì)DNA為基礎(chǔ)的新型的遺傳標(biāo)記體系，目前廣泛應(yīng)用于遺傳育種各個(gè)研究領(lǐng)域，如分子遺傳圖譜構(gòu)建、基因標(biāo)記和基因克隆、重要農(nóng)藝性狀的標(biāo)記輔助選擇以及物種親緣關(guān)系及進(jìn)化研究等。本研究利用分子標(biāo)記技術(shù)(如SSR，STS，EST-SSR等)開(kāi)展對(duì)小麥抗白粉病基因Pm6的分子標(biāo)記篩選和定位研究，并初步探討了一種新的開(kāi)發(fā)STS分子標(biāo)記的技術(shù)。

2、 1．與小麥白粉病抗性基因砌Pm6緊密連鎖的STS標(biāo)記的開(kāi)發(fā)來(lái)自提莫菲維小麥的抗白粉病基因Pm6目前在我國(guó)大部分地區(qū)仍然是有效基因，篩選與其緊密連鎖的分子標(biāo)記特別是基于PCR的分子標(biāo)記具有重要應(yīng)用價(jià)值。本研究根據(jù)與Pm6密連鎖的RFLP探針BCDl35的DNA序列設(shè)計(jì)了四對(duì)STS引物，以含小麥抗白粉病基因Pm6近等基因系及其輪回親本“Prins”基因組DNA為模板進(jìn)行PCRF增。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，引物sTS003和STS004在抗、感病材料間未

3、擴(kuò)增出多態(tài)，引物NAU/STS<,BCD135-1>和NAu/STS<,BCD135-2>在近等基因系和“Prins”之間分別能穩(wěn)定地?cái)U(kuò)增出兩條和一條多態(tài)條帶。以這兩個(gè)引物進(jìn)一步在(IGVl465×Prins)所構(gòu)建的F<,2>分離群體共424個(gè)單株中進(jìn)行擴(kuò)增，應(yīng)用Mapmarkcr3.0軟件分析分子標(biāo)記擴(kuò)增結(jié)果和抗白粉病表型鑒定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)NAU/STS<,BXD135-1>和NAU/STS<,BCD135-2>與Pm6因的遺傳距離均為

4、1.0cM。 2．普通小麥(Tritic~aostivum L．)-提莫菲維(T.timophoovi L．)近等基因系的區(qū)分和易位斷點(diǎn)的判定研究采用小麥2B染色體上的約28對(duì)SSR標(biāo)記、11對(duì)大麥2H染色體STS標(biāo)記以及其他一些基于PCR的標(biāo)記共對(duì)從瑞士引進(jìn)的抗白粉病基因Pm6的八份近等基因系進(jìn)行了分析，希望通過(guò)分子標(biāo)記標(biāo)圖來(lái)確定8份材料中滲入的提莫菲維小麥染色體片段的大小，同時(shí)結(jié)合連鎖圖譜對(duì)這些材料進(jìn)行了遺傳標(biāo)圖。研究結(jié)果與

5、陶文靜1999年采用RFLP標(biāo)記標(biāo)圖的結(jié)果基本吻合，通過(guò)研究，我們進(jìn)一步確認(rèn)IGVl465、IGVI464和IGVl463是漸滲片段最小的三個(gè)材料。另外，還分別找到了可以區(qū)別該套近等基因系的PER標(biāo)記，這為這些材料的育種應(yīng)用以及標(biāo)記輔助選擇奠定了基礎(chǔ)。 3．麥類作物中一種新的開(kāi)發(fā)STS分子標(biāo)記方法的初步研究本研究開(kāi)發(fā)與Pm6基因連鎖的STS標(biāo)記時(shí)，發(fā)現(xiàn)從RFLP探針中尋找具有簡(jiǎn)單重復(fù)序列(SSR)的STS標(biāo)記在分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)中