MicroRNA-432影響成肌細(xì)胞增殖及期通過靶向MYOZ1基因影響肌纖維類型標(biāo)記基因的表達(dá).pdf

1、MYOZ1基因在肌小節(jié)組裝和不同類型肌纖維形成等過程中起到廣泛的調(diào)控作用，MYOZ1的功能涉及骨骼肌快肌和慢肌的形成及比例。因其編碼的蛋白在肌纖維Z線形成及快肌纖維相關(guān)生理過程中起關(guān)鍵作用而被廣泛關(guān)注。該基因在骨骼肌生長發(fā)育、肌纖維類型調(diào)控以及動(dòng)物的體型和肉質(zhì)研究方面均具有重要研究價(jià)值，尋找影響MYOZ1基因表達(dá)的調(diào)控因子對(duì)改善家畜的肉質(zhì)和體型方面有重要意義。本實(shí)驗(yàn)室利用芯片結(jié)果結(jié)合表達(dá)譜分析，初步確定miR-432和MYOZ1的靶向關(guān)

2、系，通過研究靶向MYOZ1的miR-432及其在肌纖維類型變化中的調(diào)節(jié)作用，為探究miRNA調(diào)控骨骼肌生長發(fā)育及肌肉類型的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。取得的主要結(jié)果如下:
　　 (1)運(yùn)用定量Q-PCR進(jìn)行MYOZ1基因的組織表達(dá)情況檢測，在大白豬的心、肝、脾、肺、腎、小腸、骨骼肌和脂肪等組織中，該基因在骨骼肌中表達(dá)量最高而在其他組織中表達(dá)量較少。此外在豬胚胎期33天，65天和成年的骨骼肌中檢測MYOZ1的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)該基因的表達(dá)隨著豬從胚

3、胎期到成年呈上調(diào)表達(dá)。
　　 (2)定量檢測miR-432和MYOZ在C2C12細(xì)胞分化0天、1天、2天、4天和6天五個(gè)時(shí)期的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)miR-432隨著細(xì)胞的分化呈顯著的下調(diào)，而MYOZ1基因表達(dá)隨著細(xì)胞的分化呈顯著上調(diào)。
　　 (3)通過細(xì)胞中檢測雙熒光素活性，初步證明miR-432和MYOZ1的靶向互做關(guān)系。通過Western Blot免疫印跡實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測MYOZ1蛋白表達(dá)水平可被miR-432下調(diào)，進(jìn)

4、一步說明MYOZ1是miR-432的靶基因。
　　 (4)利用xCELLigence實(shí)時(shí)監(jiān)測系統(tǒng)分析miR-432在C2C12細(xì)胞增殖中的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，講內(nèi)源表達(dá)的miR-432抑制后的C2C12細(xì)胞的增殖作用明顯小于對(duì)照組細(xì)胞，說明抑制了miR-432后細(xì)胞的增殖速度下降，miR-432影響肌細(xì)胞增殖。
　　 (5) C2C12細(xì)胞中過表達(dá)miR-432后分別分化培養(yǎng)1、3、5天，收集細(xì)胞總RNA通過Q-PCR技術(shù)檢測快

5、肌maker MYH4和慢肌maker MYH7的表達(dá)情況，結(jié)果表明過表達(dá)miR-432后慢肌maker表達(dá)量上升較快，說明miR-432可以促進(jìn)慢肌的形成。通過在C2C12中過表達(dá)MYOZ1和抑制miR-432提高M(jìn)YOZ1表達(dá)水平后再分別分化1、2、4天，檢測快慢肌maker的表達(dá)情況，結(jié)果表明過表達(dá)MYOZ1和抑制細(xì)胞中本底的miR-432后，快肌makerMYH4的表達(dá)量上升較快，說明過量表達(dá)的MYOZ1和低量的miR-432導(dǎo)