柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染的致病機(jī)制研究.pdf

1、多病原的混合感染已是一個(gè)普遍現(xiàn)象，研究表明，發(fā)病雞群中混合感染的發(fā)病率達(dá)到85％。關(guān)于共感染的研究已經(jīng)有很多報(bào)道，包括對(duì)寄生蟲、細(xì)菌和各種免疫抑制性病毒的共感染的案例、流行病學(xué)調(diào)查以及對(duì)共感染致病機(jī)理進(jìn)行研究。有研究證實(shí)，球蟲感染可影響細(xì)菌感染，細(xì)菌感染也可影響球蟲致病性的強(qiáng)弱。艾美爾球蟲與沙門氏菌混合感染的病例臨床上較為常見，球蟲感染會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷腸粘膜上皮，使得雞對(duì)沙門氏菌的易感性大大提高，并且由于正常條件下球蟲感染無(wú)處不在，可能會(huì)對(duì)沙

2、門氏菌感染水平傳播造成顯著影響。雖然雞群多種病原微生物共感染現(xiàn)象非常普遍，但大多數(shù)研究仍然集中在對(duì)單個(gè)病原的深入研究，或是有限的幾種病原共感染的研究，而對(duì)球蟲和沙門氏菌的共感染研究相對(duì)比較少。鑒于柔嫩艾美爾球蟲和腸炎沙門氏菌在雞群中普遍流行的現(xiàn)狀以及目前缺乏對(duì)這兩種病原共感染的研究，本文將柔嫩艾美爾球蟲和腸炎沙門氏菌共感染雛雞，檢測(cè)混合感染對(duì)宿主致病性的影響及宿主腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變，并從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度分析二者混合感染的致病機(jī)制。試驗(yàn)具

3、體分為以下幾個(gè)部分：
　　1.混合感染對(duì)宿主的致病性及相互作用:
　　12日齡時(shí)進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)，單獨(dú)感染和混合感染球蟲和沙門氏菌，從體重增長(zhǎng)率、死亡率、免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞亞群比例等方面評(píng)價(jià)混合感染對(duì)宿主致病性的影響。結(jié)果顯示混合感染組雛雞體重呈負(fù)增長(zhǎng)，尤其是柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌同時(shí)感染組體重下降最為顯著。所有感染組CD4/CD8比例均降低，混合感染組CD4/CD8比例最低，說(shuō)明混合感染時(shí)機(jī)體自身免疫系統(tǒng)受到更嚴(yán)重

4、的損傷。此外，混合感染造成的死亡率也較球蟲和沙門氏菌單獨(dú)感染增加。以上結(jié)果說(shuō)明柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染較單獨(dú)感染對(duì)雛雞的致病性增強(qiáng)。對(duì)血便癥狀、病變計(jì)分及死亡率進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)混合感染和單獨(dú)感染均可造成盲腸嚴(yán)重病變，死亡率增加。對(duì)雛雞肝臟和脾臟沙門氏菌陽(yáng)性率及盲腸內(nèi)容物內(nèi)沙門氏菌數(shù)量進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)球蟲感染可增加沙門氏菌感染的肝、脾陽(yáng)性率，使腸炎沙門氏菌在體內(nèi)定殖時(shí)間延長(zhǎng)。以上結(jié)果說(shuō)明腸炎沙門氏菌與柔嫩艾美爾球蟲混合感染

5、具有協(xié)同致病作用。
　　2.混合感染對(duì)腸道菌群的影響:
　　我們收集了感染第五天雛雞的盲腸內(nèi)容物，通過16S rRNA Miseq高通量測(cè)序檢測(cè)雞盲腸菌群組成。結(jié)果表明，18日齡萊航雞盲腸內(nèi)主要菌群為厚壁菌門和擬桿菌門。柔嫩艾美爾球蟲感染后乳酸桿菌科和丹毒絲菌科比例減少，而沙門氏菌感染后瘤胃菌科、毛螺菌科和乳酸桿菌科增加，擬桿菌科減少。與柔嫩艾美爾球蟲或腸炎沙門氏菌單獨(dú)感染相比，混合感染導(dǎo)致腸桿菌科等條件致病菌明顯增加，乳桿

6、菌科等有益菌減少。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染打破腸道菌群平衡，使其向著有利于二者定殖的方向發(fā)展。
　　3.混合感染對(duì)宿主盲腸扁桃體蛋白質(zhì)表達(dá)的影響:
　　感染第5天收集各組實(shí)驗(yàn)雞的盲腸扁桃體，提取、純化蛋白質(zhì)，進(jìn)行雙向電泳及質(zhì)譜技術(shù)分析。經(jīng)PD Quest軟件分析后共篩選出58個(gè)差異蛋白點(diǎn)，選取兩者差異表達(dá)2倍以上的點(diǎn)34個(gè)，將這34個(gè)蛋白差異點(diǎn)送往上海中科新生命生物科技有限公司進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，其中，