番茄高頻再生系統(tǒng)的建立及果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本研究以番茄(Lycopercicon esculentum Mill)栽培品種貴妃和碧嬌為試材,建立了體外繁殖無性系,比較了不同因素對番茄子葉、下胚軸、葉片和莖段外植體再生能力的影響,并對影響外植體轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行了探討.利用農(nóng)桿菌LBA4404(pTSB)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化,獲得了碧嬌轉(zhuǎn)果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶(fructan fructosyl transferase)基因植株,轉(zhuǎn)化植株在Km50mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好,Southern雜交呈

2、陽性,證明目的基因已經(jīng)整合到碧嬌基因組中.抗凍實(shí)驗(yàn)、葉片電導(dǎo)率測定、多糖含量測定等實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證實(shí)果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶基因在番茄轉(zhuǎn)化植株中已實(shí)現(xiàn)表達(dá).本研究主要進(jìn)展如下:1.通過分別誘導(dǎo)子葉、下胚軸、葉片和莖段外植體直接分芽,建立了番茄品種貴妃和碧嬌的體外無性繁殖的高頻再生系統(tǒng),其平均再生頻率均可達(dá)95％以上.2.在再生培養(yǎng)基中添加抗壞血酸(Vc)可以有效防止葉片和莖段切口的褐化現(xiàn)象,但添加濃度過高,會使外植體的再生能力降低.最適宜的抗壞血

3、酸添加濃度為50-100mg/L.3.在再生培養(yǎng)基中添加一定濃度的AgNO<,3>能促進(jìn)外植體的再生和分化,并能有效促進(jìn)不定芽的伸長生長.有效促進(jìn)葉片外植體再生的AgNO<,3>添加濃度為1mg/L,莖段外植體為3mg/L.4.將LBA4404(pTSB)對貴妃和碧嬌兩個(gè)品種的轉(zhuǎn)化頻率進(jìn)行比較,碧嬌的轉(zhuǎn)化頻率明顯高于貴妃,抗性愈傷組織誘導(dǎo)率為15.50％.碧嬌轉(zhuǎn)化的外植體再生出完整植株,轉(zhuǎn)化植株在添加Km50mg/L的生根培養(yǎng)基中生根良

4、好.5.Southern分析證明果聚糖果糖基轉(zhuǎn)移酶基因(FFT)已整合到碧嬌基因組上.6.進(jìn)行試管苗抗凍實(shí)驗(yàn),-5℃時(shí)轉(zhuǎn)化植株和未轉(zhuǎn)化植株的生長狀況表現(xiàn)出較大差異,轉(zhuǎn)化植株的抗凍能力提高.7.對植株的葉片進(jìn)行電導(dǎo)率測定,在一定低溫范圍內(nèi),轉(zhuǎn)化植株的電導(dǎo)率要明顯低于未轉(zhuǎn)化植株,轉(zhuǎn)化植株表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗凍能力.8.表型分析可見,轉(zhuǎn)化植株在一定低溫范圍內(nèi)表現(xiàn)出抗凍能力強(qiáng)于未轉(zhuǎn)化植株,而且可以正常生長和繁殖.9.通過提取番茄葉片、莖和果實(shí)的多糖,