大腸桿菌中某些糖基轉(zhuǎn)移酶的功能研究.pdf

1、大腸桿菌是存在于人體和其它高等動物腸道內(nèi)的正常菌群。屬于條件致病菌，在宿主免疫力低下或者菌群感染寄主腸道以外其它地方時候能引起胃痛、嘔吐、腹瀉和菌血癥等病癥反應。大腸桿菌細胞表面含有脂多糖成分，脂多糖由類脂A、核心多糖和O特異多鏈組成，其中類脂A是內(nèi)毒素成分，O特異多糖鏈即O抗原是大腸桿菌致病性的基礎。
　　 控制O抗原合成的基因在大腸桿菌染色體上多成簇存在，相關的基因可以分為：單糖合成酶基因、糖基轉(zhuǎn)移酶基因和寡糖單位處理酶基因

2、。分別負責O抗原寡糖鏈中的單糖單位合成、轉(zhuǎn)移和聚合。大腸桿菌主要通過Wzx/Wzy途徑、ABC轉(zhuǎn)運途徑和合酶途徑合成O抗原。O抗原可以作為大腸桿菌的分類標識，目前根據(jù)不同的O抗原可以把大腸桿菌分為180多個血清型。而大腸桿菌O抗原基因簇中種類繁多的糖基轉(zhuǎn)移酶、單糖合成酶和寡糖單位處理酶基因為人類需要的寡糖分子的生物合成提供了豐富的基因資源。
　　 本論文結(jié)合實驗室的前期工作和實驗基礎，選擇大腸桿菌O107和O117的wclY基因

3、，大腸桿菌O6orf3，O23 orf6，O78 orf1，O88 orf11和O126 wbgK基因作為研究的對象。大腸桿菌O107的O117的O抗原多糖鏈早已被破譯，兩株菌株的多糖鏈只有一個糖單位不同，在比對分析兩株菌株的O抗原基因簇發(fā)現(xiàn)只有wclY基因有部分序列不同，所以我們預測大腸桿菌O107和O117的wclY基因各自負責這兩株菌株中那個不相同的糖單位的連接。本研究中，我們利用同源重組缺失的原理構(gòu)建O107和O117的wclY

4、基因的缺失型菌株，用氯霉素基因代替正常的wclY基因獲得缺失型菌株。然后再將O107和O117的野生型welY基因分別回補至O107和O117的wclY基因缺陷型菌株中，通過核磁分析回補菌株的多糖鏈結(jié)構(gòu)，從而驗證了這兩個基因的功能。本課題中我們還構(gòu)建了O6orf3，O23 orf6，O78 orf1，O88 orf11和O126 wbgK基因的原核表達克隆，研究確定了O6 ORF3，O23 ORF6，O78 ORF和O88 ORF11蛋