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1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文Y家族DNA聚合酶對(duì)化學(xué)致癌物MNNG應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究姓名:朱慧芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師:邵吉民20091008浙江大學(xué)博上學(xué)位論文中文摘要調(diào)控中起一定作用。應(yīng)用報(bào)告基因技術(shù)分析POLH、POLl和POLK啟動(dòng)子截短體的轉(zhuǎn)錄活性,對(duì)三個(gè)聚合酶的最小啟動(dòng)子區(qū)、轉(zhuǎn)錄激活區(qū)和抑制區(qū)進(jìn)行了定位。b定量RTPCR和/或免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)10pMMNNG可以引起POLH、POLl和POLK轉(zhuǎn)
2、錄上調(diào)。應(yīng)用突變、報(bào)告基因和轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析等技術(shù)發(fā)現(xiàn):(1)過(guò)表達(dá)IRFl上調(diào)Polrl表達(dá);將POLH啟動(dòng)子區(qū)898位或590位IRFl結(jié)合位點(diǎn)突變后,過(guò)表達(dá)IRFl不能引起其轉(zhuǎn)錄上調(diào),也抑制了MNNG引起的POLH啟動(dòng)子的活性增加,說(shuō)明IRFl與898位和590位結(jié)合,參與調(diào)控MNNG誘導(dǎo)的POLH的轉(zhuǎn)錄上調(diào)。(2)MNNG引起POLl的轉(zhuǎn)錄激活,Spl在MNNG誘導(dǎo)POLl的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起一定作用。(3)MNNG可能通過(guò)多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的
3、協(xié)同作用調(diào)節(jié)POLK的表達(dá),而起主要調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子有待于進(jìn)一步研究。c為了研究調(diào)控基因表達(dá)的“轉(zhuǎn)錄因子組”,我們初步建立了DNApulldown質(zhì)譜檢測(cè)方法,為下一步研究基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制提供有力的工具。主要結(jié)論(1)首次系統(tǒng)研究了Y家族DNA聚合酶POLH和POLl啟動(dòng)子的活性,發(fā)現(xiàn)POLH和POLl啟動(dòng)子上的多個(gè)反應(yīng)元件參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,有的是正向調(diào)控,有的則是負(fù)向調(diào)控;(2)首次證明了IRFl和Spl分別參與了MNNG誘導(dǎo)的
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