兔小囊肽的分離鑒定及生物學(xué)活性研究.pdf

1、成年健康家兔,經(jīng)腹腔注射大腸桿菌刺激后,取圓小囊組織,組織搗碎機(jī)搗碎,沸水浴處理后,以5％乙酸提取,調(diào)整pH值后,經(jīng)Sephadex G100凝膠柱過(guò)濾層析,收集各組分子并用瓊脂糖彌散法檢測(cè)各組分的抗菌活性,獲得純化的兔小囊肽,純化物經(jīng)Tricine SDS-PAGE,銀染后分析為一條蛋白帶,分子量約為7000Da左右,經(jīng)超濾分析,純化物的分子量大于3000Da.采用Dot-ELISA方法,用抗菌肽抗體檢測(cè)兔小囊肽中的抗菌肽抗原,結(jié)果為

2、陽(yáng)性,說(shuō)明兔小囊肽為抗菌肽類(lèi)物質(zhì).采用敏感的瓊脂糖彌散實(shí)驗(yàn)和活菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了兔小囊肽對(duì)10株細(xì)菌(大腸桿菌(0<,1>)、大腸桿菌(0<,78>)、豬致病性大腸桿菌自然分離株、雞致病性大腸桿菌自然分離株、白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌ATCC25923株、豬致病性沙門(mén)氏菌自然分離株、綠膿桿菌ATCC27853株、魚(yú)致病性嗜水氣單胞菌)的作用.結(jié)果表明,兔小囊肽對(duì)以上10種細(xì)菌均有不同程度的抑制作用,殺菌率由49.3％-100％.初步揭示

3、了該物質(zhì)強(qiáng)大的抗菌活性和較廣泛的抗菌譜.將用兔小囊肽處理過(guò)的綠膿桿菌固定后用醋酸雙氧軸染色,透射電鏡觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,抗菌肽對(duì)綠膿桿菌的主要作用是使菌體皺縮,染色變深,鞭毛損傷,使細(xì)胞表面形成囊泡樣結(jié)構(gòu)等.首次采用雞胚接種法觀(guān)察了兔小囊肽對(duì)雞新疫病毒強(qiáng)毒株以及雞傳染性支氣管炎病毒的滅活作用.將NDV及IBV用小囊肽處理后再接種9日齡雞胚,測(cè)定雞胚尿囊液中的NDV血凝效價(jià),并觀(guān)察雞胚病變.結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組比較,兔小囊肽使雞胚尿囊液

4、中新城疫病毒的血凝效價(jià)降低,同時(shí)還能抑制因以上兩種病毒所引起的雞胚病變.通過(guò)注射方法給予蛋雛雞兔小囊肽,并測(cè)量其體重,胸腺、脾臟、法氏囊的器官指數(shù),測(cè)量各腸段絨毛長(zhǎng)度,測(cè)定禽流感滅活疫苗入雞新城疫活疫苗的抗體水平,腸粘膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量以及腸道組織和法氏囊組織IgA陽(yáng)性物面積系數(shù),以研究兔小囊肽對(duì)以上指標(biāo)的影響.結(jié)果表明,發(fā)現(xiàn)其對(duì)雞體重增加無(wú)明顯影響;對(duì)胸腺和脾臟指數(shù)無(wú)明顯影響;對(duì)法氏囊指數(shù)有顯著影響.兔小囊肽可顯著提高十二指腸、空回

5、腸結(jié)合部腸絨毛長(zhǎng)度,對(duì)回盲腸結(jié)合部腸絨毛長(zhǎng)度無(wú)明顯影響;可提高禽流感滅活疫苗和雞新城疫活疫苗的抗體水平.使腸粘膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞顯著增加;使主要腸道組織及法氏囊組織IgA陽(yáng)性物面積系數(shù)增加.提示兔小囊肽對(duì)雞特異免疫及粘膜免疫水平均有提高作用.綜上所述,該研究首次由圓小囊組織中分離純化了兔小囊肽,并證明其為抗菌肽類(lèi)物質(zhì).同時(shí)證實(shí)上小囊肽具有抗菌、抗病毒作用.首次揭示了小囊肽具有提高全身特異性免疫抗體水平及腸道粘膜免疫功能的作用.進(jìn)一步揭示了