豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活及凋亡觀察.pdf

1、該文主要研究了激活液中Ca<'2+>濃度對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活的影響,以篩選出最佳的Ca<'2+>濃度;研究了豬體外成熟卵母細(xì)胞電激活后的體外培養(yǎng)體系,比較了不同培養(yǎng)方式、不同激活液等對(duì)豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育的影響;通過(guò)形態(tài)觀察和Hoechst33342染色,初步探明了豬成熟卵母細(xì)胞體外凋亡的規(guī)律.激活液中Ca<'2+>濃度對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活影響的實(shí)驗(yàn)中,Ca<'2+>濃度在0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mmol

2、/L5個(gè)濃度梯度中,卵裂率、囊胚率及囊胚細(xì)胞數(shù)差異不顯著(p>0.05),但0.9mmol/L時(shí)囊胚率最高(13.46±5.95);Ca<'2+>濃度在0.0~8.0mmol/L中,發(fā)現(xiàn)0.0~2.0mmol/L卵裂率、囊胚率及囊胚細(xì)胞數(shù)差異不顯著(p>0.05),但1.0mmol/L時(shí)囊胚率最高(13.98±2.63),再進(jìn)一步提高激活液中Ca<'2+>濃度會(huì)顯著降低囊胚率,但對(duì)囊胚細(xì)胞數(shù)影響不大,激活液Ca<'2+>濃度提高到6.5

3、mmol/L以上,囊胚率已經(jīng)小于5﹪.豬體外成熟卵母細(xì)胞電激活后的體外培養(yǎng)體系實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)1(激活后卵子隨機(jī)分3組培養(yǎng):分別移入NCSU23培養(yǎng)液、G2.2-aa培養(yǎng)液、G2.2培養(yǎng)液中各培養(yǎng)7d)的3個(gè)組卵裂率差異不顯著(p>0.05),NCSU23囊胚率(14.37±3.77)顯著高于G2.2、G2.2-aa組,且差異極顯著(p<0.01),但它們的囊胚細(xì)胞數(shù)差異不顯著(p>0.05).試驗(yàn)2(激活后卵子隨機(jī)分為4組培養(yǎng):NCSU2

4、3不換液培養(yǎng)7d;NCSU23液培養(yǎng)72h后移入G2.2液培養(yǎng)到7d;G2.2液培養(yǎng)72h后移入G2.2液培養(yǎng)到7d;G2.2液培養(yǎng)72h后移入NCSU23液培養(yǎng)到7d)中,4個(gè)組卵裂率差異不顯著(p>0.05),但第3組卵裂率(61.81±3.79)最高.豬成熟卵母細(xì)胞體外凋亡的觀察實(shí)驗(yàn)中,在未激活組中,胞質(zhì)不均勻分裂是主要的趨勢(shì),高于壞死和胞質(zhì)均勻分裂;胞質(zhì)不均勻分裂在24h出現(xiàn),在24~96h時(shí)間段有較大的增幅,最高胞質(zhì)不均勻分裂