小麥T型細胞質(zhì)雄性不育系及其保持系基因表達差異的研究.pdf

1、該研究采用了mRNA差異顯示技術(shù)對T型細胞質(zhì)雄性不育系小麥及其相應(yīng)保持系小麥的核基因進行比較分析.提取小麥不育系及其相應(yīng)保持系單核期、雙核期和三核期3個時期6個材料的總RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后進行PCR擴增,擴增的PCR產(chǎn)物經(jīng)6％的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,銀染染色后可觀察到清晰的條帶.差異顯示的PCR產(chǎn)物條帶絕大部分在150bp到1000bp之間,且不育系、保持系在同一時期中絕大多數(shù)的帶型相同,證明材料本身遺傳背景良好.用11對引物組合擴增

2、共得到58個差異,二次擴增回收得到44個差異.其中在保持系特異表達的有21個,在不育系特異表達的有23個.所回收的44條差異帶,經(jīng)Reverse-Northern雜交驗證后,確定陽性表達的cDNA片段有16個,其中保持系特異表達的有12個,不育系特異表達的有4個.將此16個cDNA片段克隆并測序,通過與GeneBank中的數(shù)據(jù)庫比對,4個為未知基因序列,12個與已知序列有較高的同源性.其中4號片段有24個bp與actinI 100％相同

3、,肌動蛋白對育性的影響在其他作物中已有報道.在我們的研究中,推測可能是由于細胞骨架構(gòu)建不完善,使細胞無法正常行使基本功能,從而影響小麥育性.8號片段經(jīng)比對認為是淀粉磷酸化酶基因.由發(fā)表的淀粉磷酸化酶序列設(shè)計引物,分別在保持系、不育系三核期花藥的cDNA中進行PCR擴增,得到與reverse-northern雜交完全吻合的結(jié)果,即該基因確實只在保持系的三核期花藥中特異表達,不育系的相應(yīng)時期沒有表達,同時也可以確定此片段為淀粉磷酸化酶的基因