20610.cyr61在食管鱗癌細(xì)胞中的功能及其分子機(jī)制

1、汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文碩士士學(xué)位位論文文題目題目CYR61在食管鱗癌細(xì)胞中的功能及其分子機(jī)制CYR61在食管鱗癌細(xì)胞中的功能及其分子機(jī)制英文題目英文題目TheRolesMolecularMechanismsofCYR61inEsophagealSquamousCellCarcinomaCells姓名馮財(cái)華學(xué)號(hào)10920007所在學(xué)院汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名李恩民教授許麗艷研究員專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)入學(xué)日期2009年9月答辯日期20

2、12年06月汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文摘要CYR61是一種分泌性的細(xì)胞基質(zhì)蛋白，在許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮功能。迄今，CYR61在食管鱗癌中的功能尚不明確。本課題組以往曾研究發(fā)現(xiàn)，77例食管鱗癌病人組織，CYR61mRNA異常高表達(dá)病人的生存期較長（P=0.005），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較低（29%，P=0.034），提示CYR61可能抑制食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展。本文中，為了研究CYR61在食管鱗癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能，我們通過綜合運(yùn)用真核表達(dá)、si

3、RNA干擾、westernblot、平板細(xì)胞克隆形成、Transwell細(xì)胞移動(dòng)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)和裸鼠爪墊注射等實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，從正反兩個(gè)方面，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證了CYR61蛋白在食管鱗癌細(xì)胞中發(fā)揮著“抑癌”作用：1）在EC9706和EC109等食管鱗癌細(xì)胞中，過表達(dá)CYR61抑制癌細(xì)胞的生長、促進(jìn)癌細(xì)胞的粘附、抑制細(xì)胞的侵襲和移動(dòng)；2）在KYSE180食管鱗癌細(xì)胞中，干擾CYR61表達(dá)，促進(jìn)癌細(xì)胞的生長、抑制癌細(xì)胞的

4、粘附、促進(jìn)細(xì)胞侵襲和移動(dòng)；3）在荷瘤鼠中，過表達(dá)CYR61抑制癌細(xì)胞的生長與侵襲，而干擾CYR61表達(dá)則效果相反。為了揭示CYR61抑制食管鱗癌細(xì)胞侵襲與移動(dòng)的分子機(jī)制，我們運(yùn)用基因過表達(dá)、基因表達(dá)敲降、RTPCR、westernblot、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞免疫熒光染色等實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，在EC9706、EC109和KYSE180等食管鱗癌細(xì)胞中，以CYR61蛋白的全長以及不同結(jié)構(gòu)域的缺失體（△m1△m4）相互對比，開展系列實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果顯示

5、，1）結(jié)構(gòu)域Ⅱ與CYR61蛋白抑制癌細(xì)胞侵襲與移動(dòng)的功能密切相關(guān)，而結(jié)構(gòu)域Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ與CYR61蛋白的這一功能的關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)；2）CYR61的四個(gè)結(jié)構(gòu)域均與癌細(xì)胞的粘附能力相關(guān)；3）CYR61過表達(dá)，食管鱗癌細(xì)胞中的Actin應(yīng)力纖維與粘著斑顯著增多，整合素α5β1的表達(dá)與激活受到明顯抑制；4）CYR61通過抑制整合素α5與FAK的表達(dá)，以及FAK與ERM的磷酸化，抑制食管鱗癌細(xì)胞的移動(dòng)；這其中，CYR61的結(jié)構(gòu)域Ⅱ發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而其他