1900.黃河鯉體色發(fā)生觀察及mitfa和tyr基因cdna的克隆與組織表達(dá)研究

1、川㈣f_】_[f_lI|f|llIⅧⅢ刪8l單位代碼10476l學(xué)號14201830031分類號S96河南衙粒史孳碩士學(xué)位論文黃河鯉體色發(fā)生觀察及朋i；c廊和耖，基因cDNA的克隆與組織表達(dá)研究學(xué)科、專業(yè)研究方向申請學(xué)位類別申請人指導(dǎo)教師水產(chǎn)學(xué)、水產(chǎn)養(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物種質(zhì)資源保護(hù)與遺傳育種農(nóng)學(xué)碩士王良炎李學(xué)軍教授二O一七年五月摘要mlIIIIm刪mIlIll舢刪Y3261903黃河鯉(0礦砌螂c卵fD辦以P聊口^印紀(jì)r淞)，隸屬于鯉形目(Cy

2、priIlifo衄e洲，鯉科(Cyprinidae)，鯉屬(C功rj聹緗)，因其金鱗赤尾，肉質(zhì)鮮美而聞名于世，同淞江鱸、興凱湖鮐、松花江鱖被譽(yù)為我國四大淡水名魚，是黃河流域主要的名貴優(yōu)質(zhì)魚類之一。目前對于魚類體色等方面的研究已經(jīng)開展很多，主要集中于模式生物斑馬魚(Da胛zD，|e，fD)、青鯔(研煳協(xié)腸卻Ps)或者一些觀賞魚上，但對黃河鯉體色的研究還相對較少。蚴砌基因是神經(jīng)嵴細(xì)胞向黑色素細(xì)胞定向發(fā)育過程中最早的發(fā)生標(biāo)志之一，并且其通過調(diào)

3、控酪氨酸酶基因家族的表達(dá)來參與到黑色素細(xì)胞的分化和發(fā)育。劬作為酪氨酸酶基因家族的成員之一，是黑色素合成過程中的關(guān)鍵限速酶，其表達(dá)和活性決定黑色素生成的速度和產(chǎn)量。本文以黃河鯉為實(shí)驗(yàn)材料，選取黑色素合成通路中的關(guān)鍵基因聊f砌和緲作為研究對象，克隆得到啪i翰和緲基因的全長，研究兩基因在黃河鯉各組織中的表達(dá)分布，并觀察了黃河鯉體色的形成過程，檢測兩基因在體色形成各時(shí)期的表達(dá)，進(jìn)一步探討聊f如和緲基因在魚類體色形成中的作用。1、黃河鯉聊i砌基因

4、cDNA全長的克隆和表達(dá)定位以黃河鯉黑色皮膚提取的總I礬A作為模板，克隆得到聊f加基因cDNA全長(NoKT984198)，實(shí)時(shí)熒光定量分析其在8個(gè)組織中的表達(dá)情況，免疫組化方法檢測其在兩種不同顏色皮膚的表達(dá)及定位。結(jié)果顯示：黃河鯉mf翰基因cDNA全長為1861bp，包含1462bp的開放閱讀框，編碼486個(gè)氨基酸，與錦鯉的相似性為957％。熒光定量結(jié)果顯示mf翰在黃河鯉的8個(gè)組織中均有表達(dá)，并且在肌肉中的表達(dá)顯著高于其它組織(P00

5、5)。免疫組化結(jié)果顯示：Mitfa在黑色皮膚和銀色皮膚中均有表達(dá)，并且在黑色皮膚中的表達(dá)比在銀色皮膚中表達(dá)強(qiáng)烈。2、黃河鯉妒基因cDNA全長的克隆和表達(dá)定位以黃河鯉黑色皮膚總RNA為模板，RACE方法克隆劬基因cDNA全長，實(shí)時(shí)熒光定量分析在11個(gè)組織中的表達(dá)情況，免疫組化方法檢測兩種不同顏色皮膚中的表達(dá)及定位。結(jié)果顯示：黃河鯉乃y基因cDNA全長1717bp(NoKY305667)，其中ORF長1605bp，編碼535個(gè)氨基酸，5’U