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1、蛋白質(zhì)是生命功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，揭示蛋白與蛋白間的相互作用，已成為揭示蛋白質(zhì)組復(fù)雜體系與蛋白質(zhì)功能模式的先導(dǎo)。 本文采用酵母雙雜交技術(shù)檢測水稻黑條矮縮病毒(RBSDV)蛋白間的相互作用。通過RT-PCR擴增ORF開放閱讀框的編碼序列，擴增的片斷分別與質(zhì)粒載體pGBKT7和pGADT7連接重組為誘餌質(zhì)粒和靶蛋白質(zhì)粒。檢測轉(zhuǎn)化酵母AH109的誘餌質(zhì)粒是否具有自激活發(fā)生以及重組誘餌蛋白的毒性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有重組質(zhì)粒pGBKT7-S7-2具有
2、自身激活作用，因此不能用做酵母雙雜交篩選。將pGBKT7和pGADT7的重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母AH109檢測蛋白間是否具有相互作用，通過SD/-Leu-Trp-His-Ade培養(yǎng)基篩選得到了pGBKT7-S9-1和pGADT7-S9-1，pGBKT7-S10和pGADT7-S10的陽性克隆，然后用β-半乳糖苷酶印膜法檢測陽性克隆內(nèi)LacZ報告基因的表達，PCR擴增陽性克隆，進一步驗證了陽性克隆的正確性，從而篩選出了具有自身相互作用的S9-1
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