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1、以青花菜無(wú)菌苗為試材,以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基進(jìn)行了青花菜離體再生體系的建立以及形態(tài)建成過(guò)程中生理生化變化的分析。結(jié)果表明:在所選用的子葉、下胚軸、莖段、葉片(分帶主脈和不帶主脈)、葉柄外植體中,以下胚軸和莖段為再生的最適外植體,其芽分化率可達(dá)97%;其余所選外植體按芽分化率計(jì)依次為子葉、不帶主葉脈的葉片切塊、帶主葉脈的葉片切塊、葉柄;外植體取材植株的苗齡不同,其培養(yǎng)后的分化能力不同,萌發(fā)后10d的無(wú)菌苗和生根15d的試管苗分別為下胚軸
2、和莖段的最佳取材時(shí)期;在研究所涉及的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑中以6-BA/IBA對(duì)芽分化最有效,但不同外植體對(duì)6-BA/IBA濃度和配比要求不同,下胚軸與莖段外植體以4.0/0.3mg/L為最適;在MS培養(yǎng)基中附加0.1mg/LNAA對(duì)試管苗生根時(shí)間和生根質(zhì)量均有良好作用。對(duì)青花菜離體再生過(guò)程中生理生化變化分析表明,愈傷組織形成、不定芽分化均與其組織內(nèi)部大分子變化有關(guān)??扇苄缘鞍踪|(zhì)含量在整個(gè)過(guò)程中呈增加趨勢(shì),SDS-PAGE電泳譜帶顯示伴隨外植體組織
3、細(xì)胞脫分化、愈傷組織增殖和芽分化有新的蛋白帶出現(xiàn);過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)活性也隨形態(tài)發(fā)生呈相應(yīng)的變化趨勢(shì)。 在此基礎(chǔ)上用含有正向BO-ACO2表達(dá)載體和反向BO-ACO2表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的青花菜遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究。結(jié)果表明:以子葉和下胚軸為外植體時(shí),芽分化階段Km的篩選濃度分別為20mg/L和30mg/L時(shí),篩選效果較好;在芽苗生根階段Km的篩選
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