小麥特殊材料R149的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以利用“單體附加系染色體作載體轉(zhuǎn)移外源DNA”染色體工程新方法創(chuàng)造的小麥-黑麥遠(yuǎn)緣雜交后代中選育出的一個(gè)品系R149為供試材料，在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)上，利用染色體C-分帶技術(shù)，基因組原位雜交技術(shù)，蛋白質(zhì)分離技術(shù)，特異PCR技術(shù)等對(duì)R149品系作了較為系統(tǒng)的初步研究，試圖發(fā)現(xiàn)該品系中特異的外源DNA片斷，為“單體附加系染色體作載體轉(zhuǎn)移外源DNA”育種方法提供一個(gè)可靠的證據(jù)，充分證實(shí)“小片段易位誘導(dǎo)理論”的可行性。結(jié)果如下：1

2、.用傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測R149品系結(jié)果表明：并無大片斷的黑麥染色體片斷，但其表現(xiàn)出的某些黑麥特性說明R149品系具有小片段易位。2.利用基因組原位雜交對(duì)材料R149，川農(nóng)號(hào)系列小麥進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)對(duì)照的原位雜交結(jié)果清楚地顯示一對(duì)1RS/1BL易位染色體；而品系R149原位雜交結(jié)果顯示在兩對(duì)染色體的特定位置，具有較為規(guī)則的雜交位點(diǎn)，初步判斷有可能是小片段易位。3.根據(jù)黑麥的特異重復(fù)序列psc119.1,pscH20設(shè)計(jì)引物，對(duì)R149品系

3、進(jìn)行擴(kuò)增，psc119.1、pscH20能特異的擴(kuò)增出黑麥的特異條帶，進(jìn)一步確定R149確實(shí)為黑麥小麥小片段易位系。4.對(duì)擴(kuò)增出的條帶進(jìn)行克隆、測序，并與黑麥擴(kuò)增出的條帶進(jìn)行序列進(jìn)行比較，結(jié)果顯示回收條帶的DNA序列與數(shù)據(jù)庫中公布的序列同源性可達(dá)95％，從而更為確切地證實(shí)R149含有黑麥的染色體小片斷。5.采用SDS-PAGE電泳對(duì)供試材料檢測發(fā)現(xiàn)：并無黑麥的特征谷蛋白，R149具有與最初親本綿陽11相同的非常優(yōu)異的面包加工品質(zhì)，品質(zhì)得