慢性鼻竇炎、鼻息肉與正常鼻粘膜組織差異蛋白質(zhì)的檢測及其意義.pdf

1、慢性鼻竇炎和鼻息肉是鼻粘膜的慢性炎癥性病變。近年來，越來越多的基礎(chǔ)研究證實慢性鼻竇炎和鼻息肉在病因上是多因素，在病理上是多環(huán)節(jié)，在細(xì)胞和分子生物學(xué)水平是多基因、多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與的結(jié)果，其中涉及大量不同的蛋白質(zhì)。正因為如此，對其發(fā)病機(jī)理、預(yù)后判斷和臨床分期標(biāo)準(zhǔn)長期以來沒有統(tǒng)一的認(rèn)識，妨礙了慢性鼻竇炎和鼻息肉臨床研究和診斷、治療水平的提高。蛋白質(zhì)是生命活動的直接執(zhí)行者。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)這一新興科研方法的出現(xiàn)，使我們能在同一實驗體系中高通量篩

2、選慢性鼻竇炎、鼻息肉、鼻息肉病和正常鼻粘膜組織間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，從而探索不同病變組織之間生命活動的差別。在前期研究中，我們在國內(nèi)外領(lǐng)先進(jìn)行了慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織的PH3-10差異蛋白質(zhì)組研究，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(PI)在PH 4～8的范圍。因此在本次試驗中，我們采用PH4-7窄梯度的IPG膠條進(jìn)行慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織的差異蛋白質(zhì)組研究，目的在于提高分辨率，獲得較好的分離效果，盡可能顯示低豐度蛋白質(zhì)。然

3、后采用免疫組化試驗并擴(kuò)大標(biāo)本量來進(jìn)一步驗證部分有意義的差異蛋白質(zhì)在慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織之間的差異表達(dá)并觀察其在組織細(xì)胞中的定位情況。因為只有通過反復(fù)驗證的蛋白質(zhì)才具有可靠性和穩(wěn)定性。最后將鑒定出的有意義的差異蛋白質(zhì)與臨床療效聯(lián)系起來，應(yīng)用SPSS 1 0.0統(tǒng)計軟件中的等級相關(guān)性檢驗和logistic回歸分析方法統(tǒng)計影響慢性鼻竇炎和鼻息肉療效的蛋白質(zhì)分子，這將為建立判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預(yù)后的客觀指標(biāo)和新的分型分期標(biāo)準(zhǔn)積累

4、實驗室依據(jù)。 第一章慢性鼻竇炎、鼻息肉與正常鼻粘膜組織差異蛋白質(zhì)的檢測及其意義 目的：進(jìn)行慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織PH4-7梯度的差異蛋白質(zhì)組研究，鑒定出三者之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。 材料和方法：應(yīng)用PH4～7固相PH梯度膠條行雙向凝膠電泳(2-DE)，膠體考馬斯亮藍(lán)染色后,掃描2-DE膠,PDquest圖像分析軟件比較慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織2-DE圖譜,得到三組之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點。經(jīng)M

5、ALDI-TOF-MS和ESI-Q-TOF-MS鑒定后獲得這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)的肽質(zhì)量指紋圖譜和肽序列標(biāo)簽,用Mascot軟件查詢NCBInr和SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫,鑒定出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。 結(jié)論:用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能高通量篩選慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織間存在的差異表達(dá)蛋白質(zhì),這將為慢性鼻竇炎和鼻息肉分類、分型分期和預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn)尋找新的客觀實驗室指標(biāo)打下一定的基礎(chǔ)。 第二章超氧化物歧化酶和PLUNC蛋白在慢性鼻

6、竇炎和鼻息肉組織中的表達(dá)及其I臨床意義 目的:采用免疫組化試驗并擴(kuò)大標(biāo)本量來進(jìn)一步驗證超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和PLUNC蛋白在慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織之間的差異表達(dá),并將其與臨床療效聯(lián)系起來,篩選出判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預(yù)后的客觀實驗室指標(biāo)。 材料和方法:采用免疫組化SP法分別檢測34例鼻息肉、30例慢性鼻竇炎和20例正常鼻粘膜組織中超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和PLUNC蛋白表達(dá)情況。并與臨

7、床療效聯(lián)系起來進(jìn)行等級相關(guān)和logistic回歸分析篩選出判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預(yù)后的客觀指標(biāo)。 結(jié)論：Cu／ZnSOD和PLUNC蛋白是鼻粘膜局部免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分。當(dāng)鼻粘膜受病原體侵襲或理化因素刺激引起炎癥反應(yīng)時，鼻粘膜上皮、腺上皮和杯狀細(xì)胞，尤其是腺體反應(yīng)性增生明顯，它們產(chǎn)生和分泌Cu／znSOD、PLUNC等抗炎物質(zhì)增多來產(chǎn)生炎癥防御作用。 小 結(jié) 1.建立了分辨率高和重復(fù)性好的慢性鼻竇炎

8、、鼻息肉及正常鼻粘膜組織PH4-7梯度的雙向凝膠電泳圖譜，鑒定出三種組織之間差異表達(dá)的30種蛋白質(zhì)。本研究為慢性鼻竇炎和鼻息肉的病理機(jī)制研究提供了一個新的研究方法系統(tǒng)，同時也為慢性鼻竇炎和鼻息肉等鼻粘膜炎癥性疾病蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫的豐富和完善提供了有益的數(shù)據(jù)資料； 2．有趣的是我們發(fā)現(xiàn)一批保護(hù)性蛋白質(zhì)Cu／ZnSOD、PLUNC蛋白、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)、谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶-pi、自然殺傷細(xì)胞促進(jìn)因子B(NKEF-B)

9、和DJ-1蛋白在慢性鼻竇炎組織中表達(dá)最高，而在鼻息肉組織中表達(dá)最低。從而可以推測細(xì)菌、病毒、真菌等病原體激活了鼻粘膜的炎癥防御反應(yīng)系統(tǒng)；而鼻息肉的發(fā)病可能與這種炎癥防御反應(yīng)系統(tǒng)受到破壞有關(guān)； 3．一般Cu／ZnSOD和PLUNC免疫組化陽性強(qiáng)度為“++”或“+++”者，慢性鼻竇炎和鼻息肉患者預(yù)后良好或治愈；免疫組化陽性強(qiáng)度為“一”或“+”者，手術(shù)療效不好，易復(fù)發(fā)，可作為判斷預(yù)后的客觀指標(biāo)。Cu／ZnSOD和PLUNC是機(jī)體的天然