慢性鼻竇炎、鼻息肉與正常鼻粘膜組織差異蛋白質(zhì)的檢測及其意義.pdf

1、慢性鼻竇炎和鼻息肉是鼻粘膜的慢性炎癥性病變。近年來，越來越多的基礎研究證實慢性鼻竇炎和鼻息肉在病因上是多因素，在病理上是多環(huán)節(jié)，在細胞和分子生物學水平是多基因、多信號轉導途徑參與的結果，其中涉及大量不同的蛋白質(zhì)。正因為如此，對其發(fā)病機理、預后判斷和臨床分期標準長期以來沒有統(tǒng)一的認識，妨礙了慢性鼻竇炎和鼻息肉臨床研究和診斷、治療水平的提高。蛋白質(zhì)是生命活動的直接執(zhí)行者。隨著蛋白質(zhì)組學這一新興科研方法的出現(xiàn)，使我們能在同一實驗體系中高通量篩

2、選慢性鼻竇炎、鼻息肉、鼻息肉病和正常鼻粘膜組織間差異表達的蛋白質(zhì)，從而探索不同病變組織之間生命活動的差別。在前期研究中，我們在國內(nèi)外領先進行了慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織的PH3-10差異蛋白質(zhì)組研究，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(PI)在PH 4～8的范圍。因此在本次試驗中，我們采用PH4-7窄梯度的IPG膠條進行慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織的差異蛋白質(zhì)組研究，目的在于提高分辨率，獲得較好的分離效果，盡可能顯示低豐度蛋白質(zhì)。然

3、后采用免疫組化試驗并擴大標本量來進一步驗證部分有意義的差異蛋白質(zhì)在慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織之間的差異表達并觀察其在組織細胞中的定位情況。因為只有通過反復驗證的蛋白質(zhì)才具有可靠性和穩(wěn)定性。最后將鑒定出的有意義的差異蛋白質(zhì)與臨床療效聯(lián)系起來，應用SPSS 1 0.0統(tǒng)計軟件中的等級相關性檢驗和logistic回歸分析方法統(tǒng)計影響慢性鼻竇炎和鼻息肉療效的蛋白質(zhì)分子，這將為建立判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預后的客觀指標和新的分型分期標準積累

4、實驗室依據(jù)。 第一章慢性鼻竇炎、鼻息肉與正常鼻粘膜組織差異蛋白質(zhì)的檢測及其意義 目的：進行慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織PH4-7梯度的差異蛋白質(zhì)組研究，鑒定出三者之間差異表達的蛋白質(zhì)。 材料和方法：應用PH4～7固相PH梯度膠條行雙向凝膠電泳(2-DE)，膠體考馬斯亮藍染色后,掃描2-DE膠,PDquest圖像分析軟件比較慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織2-DE圖譜,得到三組之間差異表達的蛋白質(zhì)點。經(jīng)M

5、ALDI-TOF-MS和ESI-Q-TOF-MS鑒定后獲得這些差異表達蛋白質(zhì)的肽質(zhì)量指紋圖譜和肽序列標簽,用Mascot軟件查詢NCBInr和SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫,鑒定出差異表達的蛋白質(zhì)。 結論:用蛋白質(zhì)組學技術能高通量篩選慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織間存在的差異表達蛋白質(zhì),這將為慢性鼻竇炎和鼻息肉分類、分型分期和預后判斷標準尋找新的客觀實驗室指標打下一定的基礎。 第二章超氧化物歧化酶和PLUNC蛋白在慢性鼻

6、竇炎和鼻息肉組織中的表達及其I臨床意義 目的:采用免疫組化試驗并擴大標本量來進一步驗證超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和PLUNC蛋白在慢性鼻竇炎、鼻息肉和正常鼻粘膜組織之間的差異表達,并將其與臨床療效聯(lián)系起來,篩選出判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預后的客觀實驗室指標。 材料和方法:采用免疫組化SP法分別檢測34例鼻息肉、30例慢性鼻竇炎和20例正常鼻粘膜組織中超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和PLUNC蛋白表達情況。并與臨

7、床療效聯(lián)系起來進行等級相關和logistic回歸分析篩選出判斷慢性鼻竇炎和鼻息肉預后的客觀指標。 結論：Cu／ZnSOD和PLUNC蛋白是鼻粘膜局部免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分。當鼻粘膜受病原體侵襲或理化因素刺激引起炎癥反應時，鼻粘膜上皮、腺上皮和杯狀細胞，尤其是腺體反應性增生明顯，它們產(chǎn)生和分泌Cu／znSOD、PLUNC等抗炎物質(zhì)增多來產(chǎn)生炎癥防御作用。 小 結 1.建立了分辨率高和重復性好的慢性鼻竇炎

8、、鼻息肉及正常鼻粘膜組織PH4-7梯度的雙向凝膠電泳圖譜，鑒定出三種組織之間差異表達的30種蛋白質(zhì)。本研究為慢性鼻竇炎和鼻息肉的病理機制研究提供了一個新的研究方法系統(tǒng)，同時也為慢性鼻竇炎和鼻息肉等鼻粘膜炎癥性疾病蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫的豐富和完善提供了有益的數(shù)據(jù)資料； 2．有趣的是我們發(fā)現(xiàn)一批保護性蛋白質(zhì)Cu／ZnSOD、PLUNC蛋白、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)、谷胱苷肽S轉移酶-pi、自然殺傷細胞促進因子B(NKEF-B)

9、和DJ-1蛋白在慢性鼻竇炎組織中表達最高，而在鼻息肉組織中表達最低。從而可以推測細菌、病毒、真菌等病原體激活了鼻粘膜的炎癥防御反應系統(tǒng)；而鼻息肉的發(fā)病可能與這種炎癥防御反應系統(tǒng)受到破壞有關； 3．一般Cu／ZnSOD和PLUNC免疫組化陽性強度為“++”或“+++”者，慢性鼻竇炎和鼻息肉患者預后良好或治愈；免疫組化陽性強度為“一”或“+”者，手術療效不好，易復發(fā)，可作為判斷預后的客觀指標。Cu／ZnSOD和PLUNC是機體的天然