中藥單體丹參酮Ⅱa聯(lián)合絲裂霉素對人肝癌細(xì)胞株HepG2體外作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究旨在觀察在體外中藥單體丹參酮Ⅱa與絲裂霉素聯(lián)合應(yīng)用對HepG2細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)探討作用機(jī)制，為臨床上化學(xué)治療肝癌選擇性聯(lián)合丹參酮Ⅱa用藥提供理論依據(jù)，同時(shí)為今后動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：1.實(shí)驗(yàn)選擇 HepG2細(xì)胞株為研究對象，設(shè)空白對照組、單純丹參酮Ⅱa組(濃度分別為0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,25.0mg/L)、單純絲裂霉素組(濃度分別為0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mg/L

2、）、實(shí)驗(yàn)組（丹參酮Ⅱa﹢絲裂霉素）；2.HepG2細(xì)胞采用含藥培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，分別培養(yǎng)24h、48h、72h，采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測吸光值OD570nm，體外觀察丹參酮Ⅱa單獨(dú)及聯(lián)合絲裂霉素對 HepG2細(xì)胞的抑制作用，并作抑制作用與藥物劑量及作用時(shí)間的相關(guān)分析，繪制抑制曲線并觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測藥物對HepG2細(xì)胞周期和凋亡的影響；4.采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)比較采用重復(fù)測量和單因素方

3、差分析，藥物相互作用q值以0.85＜q＜1.15表示兩藥作用疊加，q>1.15表示兩藥作用協(xié)同,而q<0.85表示兩藥相互拮抗。p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01為差異具有顯著性。
　　結(jié)果：1. MTT結(jié)果顯示，0.5mg/L～25.0mg/L丹參酮Ⅱa作用肝癌細(xì)胞24～72h后，相關(guān)分析結(jié)果提示：抑制率與作用時(shí)間和藥物濃度呈正相關(guān)，以25mg/L丹參酮Ⅱa作用72h為最高，達(dá)49.23％（p＜0.01），主要作用于Hep

4、G2細(xì)胞 G0/G1期；0.5mg/L～10.0mg/L絲裂霉素處理細(xì)胞24～72h后，相關(guān)分析結(jié)果提示：抑制率與作用時(shí)間和藥物濃度呈正相關(guān)，以5mg/L絲裂霉素作用72h為最高，達(dá)54.36%（p＜0.01），主要作用于HepG2細(xì)胞S期；2.丹參酮Ⅱa與絲裂霉素聯(lián)合應(yīng)用時(shí)則對 HepG2細(xì)胞增殖表現(xiàn)出明顯的抑制細(xì)胞增殖作用,當(dāng)濃度為0.5mg/L的丹參酮Ⅱa或絲裂霉素與其他濃度藥物聯(lián)合作用時(shí)，僅表現(xiàn)出兩種藥物的疊加作用(0.85

5、<1.15),而丹參酮Ⅱa和絲裂霉素濃度均大于0.5mg/L時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用則表現(xiàn)出協(xié)同作用(q>1.15)。相關(guān)分析結(jié)果提示抑制率與丹參酮Ⅱa濃度、絲裂霉素濃度及作用時(shí)間呈正相關(guān)，以10mg/L的丹參酮Ⅱa聯(lián)合5mg/L的絲裂霉素對肝癌細(xì)胞抑制率最高，達(dá)84.22%，在同一絲裂霉素濃度下,二藥合用時(shí)的增殖抑制率隨丹參酮Ⅱa劑量增加而增加,且協(xié)同作用的大小與丹參酮Ⅱa劑量呈正相關(guān)，同時(shí)絲裂霉素的IC50與丹參酮Ⅱa濃度呈負(fù)相關(guān)，以10mg/

6、L丹參酮Ⅱa聯(lián)合應(yīng)用時(shí)最低，為0.46±0.08mg/L（p<0.01），增敏倍數(shù)與丹參酮Ⅱa濃度呈正相關(guān)，最高為10.82（p<0.01）；3.5.0mg/L絲裂霉素與10.0mg/L丹參酮Ⅱa聯(lián)合作用肝癌細(xì)胞72h后，HepG2細(xì)胞凋亡率為21.56±0.87%，主要作用于肝癌細(xì)胞的G0/G1期和S期，凋亡率分別與5mg/L絲裂霉素組(4.17±0.32%)及10mg/L丹參酮Ⅱa組(13.64±0.46%)相比，差異具有顯著性（p

7、＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.中藥單體丹參酮Ⅱa具有顯著抑制 HepG2細(xì)胞增殖的作用，抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性，主要作用于HepG2細(xì)胞G0/G1期；同時(shí)具有誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的作用。
　　2.中藥單體丹參酮Ⅱa與絲裂霉素聯(lián)合應(yīng)用對 HepG2細(xì)胞增殖具有協(xié)同抑制作用，能增強(qiáng)該細(xì)胞系對絲裂霉素的敏感性，在同一絲裂霉素濃度下，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的增殖抑制率隨丹參酮Ⅱa劑量增加而增加，且協(xié)同作用大小與丹參酮Ⅱa劑量呈