油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌成分及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、油茶（Camellia oleifera）是我國(guó)重要的油料作物，茶油中的不飽和脂肪酸、茶多糖和微量物質(zhì)能預(yù)防人體多種疾病，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。隨著油茶產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，油茶病蟲(chóng)害日趨嚴(yán)重，其中油茶炭疽?。–amellia oleifera anthracnose）是油茶產(chǎn)區(qū)的主要病害之一，嚴(yán)重影響了油茶的產(chǎn)量與質(zhì)量。當(dāng)前化學(xué)農(nóng)藥的泛濫使用，造成環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留、生態(tài)破壞和茶油品質(zhì)下降等一系列問(wèn)題，因此，油茶病蟲(chóng)害的高效、安全、綠色生物防

2、控成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。
　　本實(shí)驗(yàn)室篩選出一株對(duì)油茶炭疽病有很強(qiáng)抑制作用的油茶拮抗放線菌CF17，為了更好的為生防菌株CF17林間應(yīng)用提供奠定理論基礎(chǔ)，本論文主要以放線菌CF17發(fā)酵液為研究對(duì)象，研究了其抑菌譜，并采用丙酮沉淀法、SPE固相萃取法、高效液相色譜法和質(zhì)譜法對(duì)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質(zhì)進(jìn)行分離純化及鑒定。研究主要結(jié)果如下:
　　(1)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質(zhì)分離。放線菌CF17進(jìn)行液體發(fā)酵得到

3、CF17發(fā)酵液，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行抑菌譜測(cè)定發(fā)現(xiàn)，放線菌CF17對(duì)炭疽屬病原菌抑菌率達(dá)到90％以上，具有用于生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)的前景。對(duì)CF17無(wú)菌發(fā)酵液通過(guò)乙醇沉淀法、乙酸乙酯沉淀法、丙酮沉淀法進(jìn)行抑菌物質(zhì)活性對(duì)比，篩選出丙酮沉淀方法為最佳提取方法。通過(guò)設(shè)置30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％不同丙酮濃度提取發(fā)酵液進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，篩選出50％的丙酮濃度為最佳提取濃度，其抑菌圈達(dá)到19.50mm，并能很好的分離發(fā)酵液中的雜質(zhì)。

4、>　　(2)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質(zhì)純化。對(duì)CF17抑菌粗提物進(jìn)行固相萃取分離純化，以乙腈為洗脫液，設(shè)置0％、10％、60％、100％不同濃度的乙腈洗脫萃取柱，經(jīng)過(guò)抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CF17抑菌物質(zhì)全部存在于60％的洗脫液中。對(duì)經(jīng)固相萃取后的抑菌物質(zhì)進(jìn)行半制備高效液相色譜純化，按時(shí)間段收集到11個(gè)組分，抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明僅只有6號(hào)(25～30min)組分能產(chǎn)生明顯抑菌圈;根據(jù)液相色譜峰強(qiáng)度收集到23個(gè)組分并進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明

5、僅15號(hào)組分色譜峰保留時(shí)間27.21min處能產(chǎn)生明顯抑菌圈，抑菌圈大小為19.55mm，與分時(shí)間段收集組分抑菌實(shí)驗(yàn)相符。優(yōu)化后的色譜條件分析色譜峰保留時(shí)間17.21min處組分，結(jié)果表明17.21min處組分主要存在兩種抑菌物質(zhì)，分別為保留時(shí)間32.58min處抑菌物質(zhì)與保留時(shí)間37.51min處抑菌物質(zhì)，且色譜峰純度達(dá)到質(zhì)譜檢測(cè)要求。
　　(3)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質(zhì)鑒定。通過(guò)離子阱質(zhì)譜對(duì)放線菌CF17抑菌物質(zhì)進(jìn)

6、行結(jié)構(gòu)解析，通過(guò)一級(jí)二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行分析，并通過(guò)與質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，鑒定CF17抑菌物質(zhì)結(jié)構(gòu)。保留時(shí)間32.58min處抑菌物質(zhì)通過(guò)離子阱質(zhì)譜推斷為T(mén)etrin B，分子式為C34H51NO14;保留時(shí)間37.51 min處抑菌物質(zhì)為T(mén)etramycinA，分子式為C35H53NO13。放線菌CF17所產(chǎn)生抑菌物質(zhì)是一類四烯大環(huán)內(nèi)酯類的抗生素，它不僅對(duì)大多數(shù)真菌性病害有抑制作用，而且能通過(guò)提高植株生長(zhǎng)素與防御酶活性，促進(jìn)植株生長(zhǎng)，提升植株抗病