DcR3基因在肺癌的擴(kuò)增和表達(dá)及其臨床意義研究.pdf

1、[目的]：研究DcR3基因在原發(fā)性肺癌中的擴(kuò)增和表達(dá)，初步探討該基因在原發(fā)性肺癌中過度表達(dá)的臨床意義。 [方法]： 1.利用DcR3單克隆抗體建立一種特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好的BA-ELISA方法，用該方法檢測89例腫瘤患者、37例炎癥患者和29例健康體檢者的血清DcR3水平。 2.利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測26例肺癌組織中DcR3的原位表達(dá)，明確肺癌患者血清中升高的DcR3來源。 3.提取26例新鮮肺

2、癌組織和5例健康體檢者外周血白細(xì)胞的基因組DNA，建立目的基因DcR3和內(nèi)參基因β-globin的定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)定量方法檢測DcR3基因在肺癌組織的相對(duì)拷貝數(shù)。 [結(jié)果]： 1.DcR3包被抗體濃度為6μg/ml，生物素標(biāo)記二抗稀釋度為1：500時(shí)，ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系最好，相關(guān)系數(shù)(r)為0.998，標(biāo)準(zhǔn)差(SD)為0.028，回歸方程為：y=1.03+0.66lgx。該方法批內(nèi)和批

3、間變異系數(shù)均低于10％，平均回收率為96％。 2.59.6％(53/89)的腫瘤患者血清DcR3水平升高，3.4％(1/29)的健康體檢者和8.1％(3/37)的炎癥患者血清DcR3水平升高(P＜0.05)。46.2％的肺癌患者血清DcR3水平升高(P＜0.05)。 3.65.4％(17/26)的肺癌組織免疫組化細(xì)胞漿染色陽性，23.1％(6/26)的肺癌組織細(xì)胞核染色陽性(包括鱗癌、腺鱗癌、大細(xì)胞癌、肺泡癌各1例，腺癌

4、2例)。T3～T4組免疫組化評(píng)分高于T1～T2組(P=0.002)；N2～N3組免疫組化評(píng)分高于N0～N1組(P=0.025)；M1組免疫組化評(píng)分高于M0組(P=0.041)；Ⅲ～Ⅳ期免疫組化評(píng)分高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.001)。免疫組化評(píng)分高的肺癌患者血清DcR3水平高(P＜0.05)。 4.DcR3基因和β-globin基因標(biāo)準(zhǔn)品的定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系好，R2分別為0.998和0.996，斜率分別為-3.73和-3.87

5、，擴(kuò)增效率分別為85.4％和81.1％。 5.26例肺癌組織中DcR3基因的擴(kuò)增倍數(shù)在0.46～5.01之間，平均值為1.87±1.25，38.5％(10/26)的肺癌組織DcR3基因擴(kuò)增倍數(shù)超過2。 [結(jié)論]： 1.本研究在國內(nèi)首次成功建立檢測血清DcR3的BA-ELISA方法，該方法特異性強(qiáng)、靈敏性高、重復(fù)性好，為DcR3的進(jìn)一步研究提供了一種新的思路。 2.肺癌組織中存在DcR3基因的過度表達(dá)，并且

6、呈現(xiàn)腫瘤細(xì)胞特異性。肺癌組織中DcR3的高表達(dá)與腫瘤大小、侵襲、轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)。血清升高的DcR3來源于肺癌細(xì)胞。 3.部分肺癌組織免疫組化顯示DcR3細(xì)胞核染色，說明DcR3可能同時(shí)是一種轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)其它腫瘤相關(guān)基因發(fā)揮調(diào)控作用。 4.本研究在國內(nèi)首次成功建立了用于熒光定量PCR的目的基因DcR3和內(nèi)參基因β-globin的標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5.原發(fā)性肺癌同時(shí)存在DcR3基因擴(kuò)增和過度表達(dá)，DcR3基