MicroRNA在HPV16(+)宮頸鱗癌組織中的異常表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　 利用MicroRNA基因芯片技術(shù),篩查HPV16(+)宮頸鱗癌組織中異常表達(dá)的miRNA基因譜,選取興趣基因,進(jìn)行分析,初步探討基因異常表達(dá)的臨床意義
　　 材料與方法：
　　 一、材料
　　 實(shí)驗(yàn)組3例:選擇收集2009年9月到2010年10月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科確診為宮頸鱗癌Ib期(HPV16+)并行手術(shù)治療的患者共3例,手術(shù)方式為經(jīng)腹廣泛性全子宮切除術(shù)+盆腔淋巴結(jié)清掃。對(duì)照組

2、3例:選取實(shí)驗(yàn)組患者宮頸正常切緣組織。
　　 二、主要試劑
　　 主要試劑及儀器:Trizol試劑(R)試劑盒(Invitrogen生命技術(shù)),miRCURYTMArray Power標(biāo)記試劑盒(Cat＃208032-A,Exiqon),miRCURYTM Array洗滌液試劑盒(Cat＃208021,Exiqon),miRCURYTM芯片(Exiqon),移液器及吸頭,分光光度儀,GenePix4000B芯片掃描儀

3、r>　　 三、方法
　　 基因芯片技術(shù)
　　 將約50-100mg新鮮樣本組織塊放入1.5ml Eppendorf管中液氮保存,從液氮中取出Eppendorf管,使用BioPluverizerTM冰凍粉碎組織,加入1ml Trizol(Invitrogen)混勻后,使用MiniBead-Beater-16勻漿后提取RNA。使用Nanodrop測(cè)定RNA在分光光度計(jì)260nm、280 nm、230 nm的吸收值,以計(jì)算濃

4、度并評(píng)估純度。用甲醛電泳試劑進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測(cè)RNA純度及完整性。用標(biāo)記酶將Hy3TM或Hy5TM熒光集團(tuán)標(biāo)記合格的RNA(miRCURYTM Array Power標(biāo)記試劑盒,Exiqon公司),具體芯片雜交標(biāo)記及雜交由上?？党缮锕就瓿伞?br>　　 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 利用GenePix4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強(qiáng)度,并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果轉(zhuǎn)換成數(shù)字型數(shù)據(jù),通過T-test篩選出的差異表達(dá)miRNA(p≤0.

5、05)并根據(jù)這些miRNA的分層聚類。利用Scatter Plot等軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)基因,篩選興趣基因,通過(MICROCOSM,TARGETSCAN,PICTAR-VERT)預(yù)測(cè)差異miRNA的靶基因,進(jìn)行GO、pathway分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、72個(gè)miRNA的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中68個(gè)表達(dá)上調(diào),4個(gè)表達(dá)下調(diào)
　　 2.選取miR-155,miR-218,m