胃癌組織miRNAs的異常表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、第一部分腸型胃癌miRNA表達(dá)譜
　　目的:篩選腸型胃癌組織異常表達(dá)的miRNAs。
　　方法:我們采用miRCURYTM Array LNA microRNA chip基因芯片比較腸型胃癌組織和鄰近非腫瘤組織之間差異表達(dá)的miRNA,6對(duì)配對(duì)的病理標(biāo)本均屬于腸型胃癌的TNM分期的Ⅲ期或Ⅳ期。設(shè)定平均上升或下降倍數(shù)大于2倍和p值小于0.01為標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:發(fā)現(xiàn)在40個(gè)上調(diào)基因表達(dá)的miRNAs中,其中24個(gè)基因已證

2、實(shí)在胃癌癌組織中異常表達(dá),新發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的miRNAs也包括一些最新鑒定的基因如miR-886-5p、miR-1259和miR-1308等。在36個(gè)下調(diào)基因表達(dá)的miRNAs中,19個(gè)miRNAs己報(bào)道在胃癌組織中異常表達(dá),在腸型胃癌組織中新發(fā)現(xiàn)了17個(gè)miRNAs異常表達(dá)以及未知功能的miRNAs等。RT-qPCR結(jié)果顯示,5個(gè)表達(dá)上調(diào)的miRNAs在29例腸型胃癌腫瘤組織中也異常高表達(dá),;同樣5個(gè)表達(dá)下調(diào)的miRNAs在腫瘤組織中也

3、呈低表達(dá)。對(duì)基因芯片與RT-qPCR分析結(jié)果進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)表達(dá)上調(diào)的miRNAs其R值為0.98,表達(dá)下調(diào)miRNA其R值為0.90,所有10個(gè)表達(dá)異常miRNAs其R值為0.96。Clustering聚類(lèi)分析顯示所有76個(gè)miRNAs表達(dá)模式非常相似,相同的病理分期標(biāo)本歸于同一亞簇。相對(duì)于以往的研究,我們?cè)谀c型胃癌基因芯片分析中鑒定了更多的miRNAs,也發(fā)現(xiàn)許多新的miRNAs在在腸型胃癌中異常表達(dá)。
　　

4、結(jié)論:
　?、偈状螆?bào)道腸型胃癌組織miRNA表達(dá)譜。
　?、诤Y選了在腸型胃癌組織中76個(gè)異常表達(dá)的miRNAs,其中43個(gè)miRNAs已報(bào)道在胃癌或胃癌細(xì)胞系中呈異常表達(dá),33個(gè)為新發(fā)現(xiàn)在腸型胃癌組織中異常表達(dá)的miRNAs。
　?、跼T-qPCR擴(kuò)增分析確定了本研究miRNAs基因芯片分析的可靠性。
　　第二部分腸型胃癌與彌漫型胃癌組織miRNA表達(dá)差異的研究
　　目的:腸型胃癌與彌漫型胃癌存在不同癌變分

5、子機(jī)理,分析miRNA表達(dá)模式與表達(dá)水平在腸型胃癌與彌漫型胃癌組織中是否存在差異。
　　方法:選擇4個(gè)在胃癌組織中異常表達(dá)的miRNAs,采用RT-qPCR檢測(cè)21例配對(duì)的彌漫型胃癌組織及癌旁組織與29例配對(duì)的腸型胃癌組織及癌旁組織miRNAs的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　?、倥c配對(duì)的癌旁組織比較,miR-27a在彌漫型胃癌組織中增加至癌旁組織的5.54倍,在腸型胃癌組織中的表達(dá)水平增加至癌旁組織的3.22倍,雖然兩者均

6、呈現(xiàn)高表達(dá),但在彌漫型胃癌組織中miR-27a表達(dá)更高,與腸型胃癌相比,具有顯著性差異。
　?、趍iR-494在腸型胃癌組織與彌漫型胃癌組織中均表達(dá)下調(diào),相對(duì)癌旁組織,彌漫型胃癌組織中下降至癌旁組織的0.23倍,而在腸型胃癌組織中只下降至癌旁組織的0.43倍,且兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　?、叟c配對(duì)的癌旁組織比較,miR-145在腸型胃癌組織中下調(diào)至癌旁組織的0.34倍,有顯著性差異:但在彌漫型胃癌組織中miR-145表達(dá)水

7、平與癌旁組織比無(wú)顯著性差異。
　?、躮iR-886-5p在兩種亞型胃癌組織中均表達(dá)上調(diào),在兩種亞型胃癌組織中表達(dá)水平相似,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩者無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:miRNAs在兩個(gè)亞型癌組織中呈現(xiàn)不同的表達(dá)模式與表達(dá)水平,這可能與兩種亞型癌不同的病理進(jìn)程相關(guān)。闡明不同亞型間miRNAs異常表達(dá)模型與表達(dá)水平的差異,將有助于闡明胃癌癌變的分子機(jī)理。
　　第三部分 miRNA的表達(dá)水平與腸型胃癌的病理分期相關(guān)。
　　

8、目的:確定miRNAs的異常表達(dá)是否與腸型胃癌的惡性演進(jìn)相關(guān)。
　　方法:選取了4個(gè)可能與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNAs,采用RT-qPCR分析其在29例不同病理階段的腸型胃癌組織表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　?、倥c癌旁組織比較,miR-32在腸型胃癌Ⅰ期病理標(biāo)本中表達(dá)水平明顯上升,但其表達(dá)水平比Ⅲ與Ⅳ期病理標(biāo)本相比明顯降低,p值分別是0.0046和0.004。雖然Ⅱ期和Ⅲ期病理標(biāo)本之間miR-32表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異,

9、但Ⅳ期與Ⅱ期病理標(biāo)本之間存在顯著性地差異。
　?、谂c癌旁組織比較,miR-182在腸型胃癌各期標(biāo)本中均表達(dá)上調(diào),但在Ⅰ期病理標(biāo)本與Ⅱ期病理標(biāo)本之間、在Ⅲ期與Ⅳ期病理標(biāo)本之間無(wú)顯著性差異,但Ⅰ期&Ⅱ期與Ⅲ期&Ⅳ期病理標(biāo)本之間,具有顯著性差異。
　?、嗯c癌旁組織比較,miR-143在Ⅳ期病理標(biāo)本中顯著表達(dá)下調(diào),與Ⅰ期&Ⅱ期相比,有明顯差異,p值分別為0.032和0.035。
　　④miR-886-5p在各期腸型胃癌組織中表

10、達(dá)下調(diào),但Ⅰ期與Ⅲ期、Ⅰ期與Ⅳ期病理標(biāo)本之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:miR-32、miR-182和miR-143表達(dá)水平的差異與腸型胃癌的病理分期相關(guān),它們可能參與了腸型胃癌惡性演進(jìn)過(guò)程。
　　總之,本研究篩選了一批新的miRNAs在腸型胃癌組織中異常表達(dá),分析了一些miRNAs在腸型胃癌與彌漫型胃癌中表達(dá)模式的差異,同時(shí),發(fā)現(xiàn)了miR-32、miR-182和miR-143異常表達(dá)水平與腸型胃癌病理分期相關(guān),這些研究將為闡