大鼠皮質(zhì)脊髓束與紅核脊髓束定位損傷后的蛋白組學(xué)研究.pdf

1、目的：研究皮質(zhì)脊髓背側(cè)束和紅核脊髓束定位損傷后蛋白變化的差異，從而為探索脊髓損傷后的修復(fù)是否符合進(jìn)化論的原則打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 方法：本次試驗(yàn)擬采用70±2天，質(zhì)量為200～230g的SD雌性大鼠12只，隨機(jī)取出分為4個(gè)組，每組3只，即假手術(shù)組、紅核脊髓損傷組、皮質(zhì)脊髓損傷組、薄束楔束損傷組。在分組后分別利用本實(shí)驗(yàn)室自制的寬為0.6mm的刀片在立體定位儀和顯微鏡的配合下制作相應(yīng)的動(dòng)物脊髓損傷模型，每組損傷后3天取脊髓損傷水平

2、上下1cm的脊髓組織稱重，保存。采用雙向電泳技術(shù)(two-dimensionaleleetrophoresis，2-DE)分離蛋白質(zhì)，得到各組雙向電泳凝膠圖譜，分析不同部位各組間雙向電泳圖譜中表達(dá)明顯差異的蛋白質(zhì)(蛋白點(diǎn)量上調(diào)相差2倍或以上；下調(diào)相差0.5或以上倍為標(biāo)準(zhǔn))：采用質(zhì)譜技術(shù)檢測出篩選的表達(dá)明顯差異蛋白質(zhì)的肽指紋圖，并應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)進(jìn)一步鑒定這些蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果：蛋白組學(xué)檢測結(jié)果顯示：雙向電泳圖譜經(jīng)分析檢測到的

3、各組總蛋白點(diǎn)數(shù)：對(duì)照組1519±82，紅核脊髓束損傷組1492±94，薄束楔束損傷組1517±33，皮質(zhì)脊髓束損傷組1378±112.蛋白點(diǎn)多分布于pI5～7、MW10 kDa～80 kDa的范圍：以對(duì)照組為參考膠，平均圖譜匹配率達(dá)75％以上。紅核脊髓束損傷組與假手術(shù)組比較檢測到12個(gè)蛋白差異點(diǎn)，其中10個(gè)含量上調(diào)，2個(gè)含量下調(diào)；皮質(zhì)脊髓束損傷組與假手術(shù)組比較12個(gè)蛋白差異點(diǎn)，其中8個(gè)含量上調(diào)，4個(gè)含量下調(diào)。應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)成功鑒定了以上差

4、異蛋白。差異蛋白按功能可分為幾類：與代謝相關(guān)蛋白：ATP合酶；a-烯醇化酶；磷酸丙糖異構(gòu)酶-1；轉(zhuǎn)鐵蛋白；二氫硫辛酰胺脫氫酶；神經(jīng)元變性死亡相關(guān)蛋白：動(dòng)力蛋白；抗氧化機(jī)能相關(guān)蛋白：谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶；硫氧還原蛋白過氧化物酶2；神經(jīng)傳導(dǎo)與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白：膜聯(lián)蛋白1；盤狀球蛋白；NARE；甲狀腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白；應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)蛋白：a-GDP解離抑制因子；膠質(zhì)瘢痕形成相關(guān)蛋白：波形蛋白；其他相關(guān)蛋白：白蛋白；多聚泛素。
　　 結(jié)論：發(fā)現(xiàn)在皮