腸道多重耐藥細(xì)菌感染動(dòng)物模型的建立及益生菌干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立小鼠腸道多重耐藥細(xì)菌感染模型，研究益生菌對(duì)多重耐藥銅綠假單胞菌感染小鼠結(jié)腸屏障功能的保護(hù)作用及致病菌本身耐藥性質(zhì)的變化，為控制和治療因耐藥菌引起的感染奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1.將6周齡雄性BALB/ C小鼠隨機(jī)分成4組：對(duì)照組、MDR-PA組、MDR-PA+抗生素組和MDR-PA+禁食組。
　　2.采用MDR-PA+抗生素組小鼠模型，將8周齡雄性小鼠分組:對(duì)照組、MDR-PA組、MDR-PA+LP組和LP組。<

2、br>　　3.方法1和方法2均記錄各組小鼠精神狀態(tài)、糞便及體重變化；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取回盲部?jī)?nèi)容物行細(xì)菌培養(yǎng)＋藥敏，結(jié)腸組織行病理學(xué)觀察、炎癥評(píng)分、TNF-α和INF-γ濃度檢測(cè)。方法2中小鼠結(jié)腸再行通透性、TER及緊密連接蛋白表達(dá)檢測(cè)。
　　4.采用黏附實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)益生菌拮抗銅綠假單胞菌粘附與侵襲Caco-2細(xì)胞的作用；多重耐藥銅綠假單胞菌誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)，行流式細(xì)胞術(shù)分析；細(xì)菌培養(yǎng)＋藥敏，檢測(cè)細(xì)菌耐藥性質(zhì)的變化。
　　

3、結(jié)果：1.經(jīng)過(guò)處理的三組小鼠較對(duì)照組均出現(xiàn)炎癥因子TNF-α和INF-γ的濃度明顯升高和光鏡下出現(xiàn)炎癥病變，但MDR-PA+抗生素組的小鼠的炎癥因子和炎癥評(píng)分較另外兩組明顯升高；鏡下觀察MDR-PA+抗生素組的炎癥病變較其余兩組嚴(yán)重。
　　2. MDR-PA組小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞旁路的通透性存在異常增加，伴有緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、occludin、和claudin-1表達(dá)降低和異常分布。炎癥因子TNF-α和INF-γ濃度增高。

4、LP干擾后，小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞旁路的通透性降低，緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、occludin、和claudin-1表達(dá)分布接近正常，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。炎癥因子TNF-α和INF-γ濃度減少接近正常,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.益生菌呈劑量依賴的方式抑制MDR-PA黏附和侵襲Caco-2細(xì)胞，當(dāng)益生菌劑量為109 CFU時(shí)，MDR-PA侵襲力下降了86%。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MDR-PA可誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞凋亡，

5、隨著MDR-PA劑量的增加腸上皮細(xì)胞凋亡率逐漸升高；LP可有效抑制MDR-PA對(duì)Caco-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡，且黏附抑制法較競(jìng)爭(zhēng)性排斥法的抑制效果更明顯。
　　4.益生菌干預(yù)后，銅綠假單胞菌的美羅培南（MEM10ug）和哌拉西林/他唑巴坦(TZP110)或氨曲南（ATM-30）和頭孢他啶（CAZ-30）的藥敏直徑均較MDR-PA組直徑增大，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1.三種方法均可成功建立腸道多重耐藥細(xì)菌感染動(dòng)物模型，各模型