HMGA2在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床病理意義及其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　肺癌在多數(shù)發(fā)展中國(guó)家的腫瘤性死亡中占首位。它的一個(gè)病理學(xué)特點(diǎn)是具有較強(qiáng)的侵襲及轉(zhuǎn)移傾向。在腫瘤的侵襲前沿部位，腫瘤細(xì)胞脫離癌巢，獨(dú)立生長(zhǎng)，并發(fā)生外形變化，由多角形轉(zhuǎn)變?yōu)轭?lèi)似于間質(zhì)細(xì)胞的梭形[1，2，3]。近期的研究表明，在多種癌癥中侵襲部的腫瘤細(xì)胞會(huì)丟失某些上皮組織特性如E-cadhelin表達(dá)缺失，而獲得某些間質(zhì)細(xì)胞特性如一些間質(zhì)蛋白的表達(dá)增強(qiáng)[4]。由梭形及多形細(xì)胞構(gòu)成的肉瘤往往表現(xiàn)出強(qiáng)侵襲性的生物學(xué)特點(diǎn)及很差的預(yù)

2、后。那么癌上皮細(xì)胞可能會(huì)因?yàn)殚g質(zhì)化而獲得間質(zhì)惡性腫瘤的這些特點(diǎn)[5]。因此，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化即癌細(xì)胞的間質(zhì)化過(guò)程被認(rèn)為是腫瘤發(fā)展過(guò)程中的重要步驟。然而，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞間質(zhì)化確切的分子機(jī)制仍知之甚少。HMGA2是一種構(gòu)象因子，通過(guò)三個(gè)DNA結(jié)合域(AT-hooks)結(jié)合其他的轉(zhuǎn)錄因子，從而擁有改變DNA構(gòu)型的能力[6，7]。HMGA2參與胚胎的形成過(guò)程的特定時(shí)期，并且參與了一些良性間質(zhì)組織腫瘤如脂肪瘤，脂肪肌瘤，平滑肌瘤的形成[8，9，1

3、0]。有證據(jù)表明HMGA2在間質(zhì)細(xì)胞的分化和增殖過(guò)程中起到了重要作用。而許多實(shí)驗(yàn)也表明多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)HMGA2高表達(dá)，并且其表達(dá)與預(yù)后相關(guān)。
　　本試驗(yàn)中，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法、Westernblot以及Real-Time RT-PCR方法測(cè)定HMGA2在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)情況，并研究HMGA2在NSCLC中的組織定位情況以及HMGA2的表達(dá)與患者預(yù)后之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1、臨床標(biāo)本的

4、收集:總共67例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本均為日本金澤醫(yī)科大學(xué)外科手術(shù)切除，并獲得患者同意取樣。取得時(shí)間為1998.10-2004.9。35例鱗癌(11例中心型，24例周?chē)?7例高分化，22例中分化，6例低分化）;29例腺癌(15例高分化其中7例細(xì)支氣管肺泡癌，7例中分化，7例低分化);3例原位癌。鱗癌平均年齡71歲（57-84歲），腺癌平均年齡59歲（47-79歲）。平均隨訪時(shí)間42個(gè)月（12-86個(gè)月）。所有患者術(shù)前均未行放化療。所有標(biāo)本均

5、經(jīng)10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，均經(jīng)HE染色組織學(xué)觀察。病例診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。
　　另外獲得以上病例中29例鱗癌及29例腺癌-80℃液氮深凍儲(chǔ)存標(biāo)本。
　　2、免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果分析:應(yīng)用ABC免疫組化試劑盒按照ABC法進(jìn)行免疫組化染色，免疫組化染色結(jié)果采用二級(jí)記分法進(jìn)行判定，結(jié)果判定由兩位病理科醫(yī)生分別獨(dú)立完成，取二者平均值作為最終結(jié)果。
　　3、Realtime RT-PCR熒光定量法檢測(cè)

6、HMGA2在組織標(biāo)本中的表達(dá):肺癌組織、癌旁正常肺組織均按ISOGEN法提取總RNA，然后進(jìn)行RealtimeRT-PCR檢測(cè)，GAPDH作為看家基因作為每次反應(yīng)RNA量的內(nèi)參照。
　　4、Western Blot半定量法檢測(cè)HMGA2在組織標(biāo)本中的表達(dá):肺癌組織、癌旁正常肺組織和肺癌細(xì)胞按照常規(guī)方法提取胞漿總蛋白，進(jìn)行蛋白定量后，進(jìn)行Western Blot，最終的結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　5、用SPSS11.0軟件包進(jìn)行

7、統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用One-Way ANOVA比較各組臨床病理因素間HMGA2mRNA及蛋白表達(dá)的差異。應(yīng)用Kaplan-Meier曲線進(jìn)行預(yù)后分析，用log-rank檢驗(yàn)比較預(yù)后差異。使用多因素的Cox—比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析決定是否為獨(dú)立預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素。P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。原位癌例數(shù)較少不列為統(tǒng)計(jì)之中。
　　結(jié)果：
　　1、首先我們通過(guò)免疫組織化學(xué)、RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)HMGA2mRNA和HMG

8、A2蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織、癌旁正常肺組織中的表達(dá)，不同的方法檢測(cè)的結(jié)果一致顯示其在肺癌組織中的表達(dá)顯著高于其在正常肺組織中的表達(dá)。HMGA2表達(dá)于NSCLC的細(xì)胞核，正常肺組織細(xì)胞均未表達(dá)。在鱗癌中，HMGA2的表達(dá)陽(yáng)性率是62.9％(22/35)，并且陽(yáng)性表達(dá)的部位僅限于腫瘤邊緣的侵襲部前沿，而在腫瘤的中心部位腫瘤細(xì)胞很少有陽(yáng)性反應(yīng)。而3例原位鱗癌并沒(méi)有表達(dá)HMGA2。腺癌中HMGA2表達(dá)陽(yáng)性率為75.9％(22/29)，其表達(dá)通常

9、位于沿肺泡壁生長(zhǎng)的細(xì)胞以及粘液中的飄浮細(xì)胞HMGA2在肺鱗癌中的表達(dá)與TNM分期，T分期及N分期存在有意義的相關(guān)性。在Ⅱ-Ⅳ期，T3-4的病例中的表達(dá)分別高于Ⅰ期，T1-2 N(-)的病例。N(+)陽(yáng)性病例HMGA2均表達(dá)陽(yáng)性。
　　2、HMGA2的表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移及患者轉(zhuǎn)歸相關(guān)。HMGA2的表達(dá)陽(yáng)性者的預(yù)后明顯不如HMGA2的表達(dá)陰性者(P＜0.05)。35例鱗癌中15例患者死于腫瘤復(fù)發(fā)，所有這15例患者HMGA2均表達(dá)陽(yáng)性。其

10、中8人術(shù)后病理證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，7例沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移但是HMGA2表達(dá)陽(yáng)性，腫瘤出現(xiàn)復(fù)發(fā)。其余20例患者中有6例死于非腫瘤原因。所有的22例HMGA2表達(dá)陽(yáng)性者中7例未出現(xiàn)復(fù)發(fā)，其中4例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，3例淋巴結(jié)為陰性（均為Ⅰ期）。提示HMGA2表達(dá)陽(yáng)性而術(shù)后未復(fù)發(fā)者，可能在腫瘤的早期就完成了有效的外科根治手術(shù)。 Kaplan-Meier曲線進(jìn)行預(yù)后分析表明HMGA2表達(dá)陰性者的預(yù)后明顯好于陽(yáng)性者。應(yīng)用多因素的Cox回歸分析表明:轉(zhuǎn)移情況，

11、N分期以及HMGA2染色結(jié)果均為有意義的獨(dú)立預(yù)后影響因子。HMGA2染色陽(yáng)性結(jié)果是一個(gè)獨(dú)立的生存期預(yù)測(cè)因子其風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)為3.482，95％可信區(qū)間分別為:1.395-8.691。而其他的因素包括年齡、性別、T分期、生長(zhǎng)方式及組織學(xué)分化程度均未能與預(yù)后獨(dú)立相關(guān)。
　　3、通過(guò)對(duì)HMGA2與E-cadherin，TP53，PCNA免疫組化表達(dá)結(jié)果的比較表明，HMGA2的表達(dá)與TP53，PCNA的表達(dá)并沒(méi)有有意義的相關(guān)性，而與E-cadh

12、erin的表達(dá)結(jié)果在大多數(shù)標(biāo)本中，兩者表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)，并且在相應(yīng)的表達(dá)部位兩者也是呈負(fù)相關(guān)的，即在腫瘤的侵襲部前沿HMGA2高表達(dá)，而E-cadherin弱表達(dá)或不表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、高遷移率蛋白基因HGMA2在NSCLC組織中明顯高于其在正常肺組織中的表達(dá)，并且與患者的臨床病理因素（病理分期、N因素、T分期）相關(guān)，基于此，可為NSCLC的病理診斷提供了一個(gè)新的免疫組織化學(xué)指標(biāo)，可能會(huì)對(duì)NSCLC的診斷提供一定