磺胺甲噁唑單克隆抗體試劑盒的研究.pdf

1、本研究通過3個(gè)試驗(yàn)初步制備了磺胺甲噁唑(SMZ)單克隆抗體免疫檢測(cè)試劑盒。試驗(yàn)一采用重氮法制備了SMZ完全抗原，并利用已獲得的SMZ雜交瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)誘生擴(kuò)增抗體，并對(duì)產(chǎn)生的單克隆抗體進(jìn)行鑒定，從而為ELISA檢測(cè)提供條件；試驗(yàn)二用辣根過氧化物酶標(biāo)記抗原和單克隆抗體，同時(shí)制備SMZ多克隆抗體，比較四種檢測(cè)SMZ的ELISA方法，從中選出最適的試劑盒檢測(cè)方法；試驗(yàn)三對(duì)選定的試劑盒檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)條件的優(yōu)化，組裝SMZ單克隆抗體免疫檢測(cè)試

2、劑盒，并對(duì)其檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SMZ完全抗原偶聯(lián)成功，SMZ與載體蛋白的結(jié)合比為19：1。雜交瘤細(xì)胞誘生小鼠腹水的效價(jià)為8×104；經(jīng)辛酸-飽和硫酸銨法純化后蛋白濃度為3.05mg/mL，效價(jià)為106。制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2為0.9956。選擇了包被抗原間接競(jìng)爭(zhēng)法作為試劑盒的檢測(cè)方法。試劑盒的檢測(cè)程序?yàn)椋和耆乖?μg/mL包被酶標(biāo)板，包被液為CBS，包被條件為4℃包被過夜；封閉液為10％小牛血清，封閉條件為37℃孵育2h；