低氧對人外周血T淋巴細(xì)胞生存活性的影響及其機制研究.pdf

1、免疫系統(tǒng)是機體的重要防御系統(tǒng)，通過識別自我和異己產(chǎn)生免疫應(yīng)答，發(fā)揮防御、監(jiān)視和免疫自穩(wěn)功能。T細(xì)胞足淋巴細(xì)胞的主要組成部分，是免疫系統(tǒng)中重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，介導(dǎo)機體的特異性免疫應(yīng)答。T細(xì)胞功能活性的發(fā)揮受局部組織微環(huán)境的影響，包括氧濃度和細(xì)胞因子的分泌等。對荷瘤動物模型的體內(nèi)研究和實體瘤患者的臨床檢測表明，在腫瘤局部免疫應(yīng)答低下，免疫細(xì)胞功能受到嚴(yán)重抑制。而腫瘤局部微環(huán)境的一個顯著特征是存在一種極度低氧狀態(tài)，它能影響免疫應(yīng)答的類型和效果

2、，參與炎癥及腫瘤等具有局部低氧微環(huán)境特征性病理過程的發(fā)生與轉(zhuǎn)歸，但有關(guān)低氧對T細(xì)胞功能表型改變及機制的報道甚少。近年來的研究發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞表面重要功能受體CCR7的表達(dá)與其生存密切相關(guān)，已證實腫瘤患者T淋巴細(xì)胞凋亡加速，與其細(xì)胞表面CCR7表達(dá)下調(diào)有關(guān)，但機制目前尚不清楚。我們從低氧引發(fā)的信號通路對T細(xì)胞生存活性和功能受體CCR7表達(dá)的影響方面對腫瘤微環(huán)境中免疫應(yīng)答低下的原因和機制進(jìn)行了驗證和探討，這對理解固有和過繼性免疫以及開展新的和

3、更具有選擇性的抗炎和抗腫瘤治療都具有重要的意義。 1.目的 體外模擬腫瘤低氧微環(huán)境，檢測低氧對T淋巴細(xì)胞生存活性的影響及其機制，揭示腫瘤微環(huán)境中免疫耐受和免疫逃逸機制的分子基礎(chǔ)，為腫瘤疫苗的研發(fā)以及其他基于免疫的癌癥治療方案提供理論依據(jù)。 2.方法 2.1人外周血單個核細(xì)胞中T淋巴細(xì)胞的分離與培養(yǎng)； 2.2流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞上CCR7的表達(dá)； 2.3流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞的凋亡率；

4、 2.4RT-PCR檢測T淋巴細(xì)胞上腺苷受體的表達(dá)； 2.5激動和阻斷T淋巴細(xì)胞上的腺苷受體，流式細(xì)胞術(shù)檢測CCR7的表達(dá)和細(xì)胞的凋亡率。 3.結(jié)果 3.1低氧(1％O2)、LPS均不影響人外周血T淋巴細(xì)胞的生物學(xué)形態(tài)； 3.2低氧抑制T淋巴細(xì)胞上CCR7的表達(dá)(P＜0.05)，而LPS對CCR7的表達(dá)沒有影響； 3.3低氧上調(diào)T淋巴細(xì)胞的凋亡率(P＜0.05)，而LPS對細(xì)胞的生存活性沒

5、有影響； 3.4在常氧(21％O2)和低氧(1％O2)環(huán)境下，四種腺苷受體在T淋巴細(xì)胞上均有表達(dá)，其中低氧環(huán)境下表達(dá)下調(diào)的基因是A1R(P＜0.05)，表達(dá)上調(diào)的基因是A2aR和A2bR(P＜0.05)，A3R的表達(dá)沒有顯著變化； 3.5常氧環(huán)境下激動總體腺苷受體和單一激動A2aR均能抑制T淋巴細(xì)胞上CCR7的表達(dá)和細(xì)胞的生存活性(P＜0.05)，而A1R和A3R的作用不明顯； 3.6低氧環(huán)境下阻斷A2aR或A2

6、bR均能上調(diào)T淋巴細(xì)胞上CCR7的表達(dá)和細(xì)胞的生存活性(P＜0.05)。 4.結(jié)論 4.1低氧微環(huán)境促進(jìn)T細(xì)胞凋亡，其機制可能與其CCR7表達(dá)的下調(diào)有關(guān)； 4.2T細(xì)胞上四種腺苷受體在常氧和低氧條件下都有表達(dá)；低氧下T細(xì)胞上A2aR和A2bR表達(dá)上調(diào)，A1R表達(dá)下調(diào)，A3R的表達(dá)沒有顯著改變； 4.3低氧條件下CCR7表達(dá)降低引發(fā)的細(xì)胞生存活性的降低與A2aR和A2bR信號通路有關(guān)。 綜上所述，腫