滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的： 觀察人胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖與細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響，探討滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞輔助T細(xì)胞細(xì)胞因子(Th)1/Th2平衡的影響，探討滋養(yǎng)細(xì)胞源性影響T細(xì)胞的效應(yīng)分子。 材料與方法： 分離早孕胎盤(pán)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，制備滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基，供淋巴細(xì)胞培養(yǎng)用。分離、純化健康未孕婦女T淋巴細(xì)胞。以植物血凝素刺激T淋巴細(xì)胞，3H-胸腺嘧啶摻入法測(cè)定T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)定淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，放

2、射免疫分析法測(cè)定培養(yǎng)基雌二醇、孕酮、人絨毛膜促性腺激素和人胎盤(pán)生乳素濃度。高效液相分析測(cè)定培養(yǎng)基中色氨酸濃度。建立早孕絨毛組織培養(yǎng)，制備絨毛組織條件培養(yǎng)基，經(jīng)濃縮、電泳、切膠、膠內(nèi)酶解和脫鹽等處理，鳥(niǎo)槍策略串聯(lián)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)譜。質(zhì)譜測(cè)序數(shù)據(jù)查人蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，查庫(kù)結(jié)果進(jìn)行GOA分類(lèi)，并查PUBMED醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)庫(kù)、復(fù)習(xí)文獻(xiàn)。 結(jié)果： (1)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基中檢測(cè)到人絨毛膜促性腺激素、人胎盤(pán)生乳素、雌二醇和孕酮，而對(duì)照培養(yǎng)基

3、中未檢測(cè)到4種激素。對(duì)照培養(yǎng)基的色氨酸濃度為19.01±1.04μmol/L，條件培養(yǎng)基為3.79±0.45 μmol/L，當(dāng)制備條件培養(yǎng)基時(shí)添加特異性吲哚胺2，3雙氧化酶(IDO)抑制物1-甲基色氨酸，條件培養(yǎng)基中色氨酸濃度為15.40±2.66 μmol/L。 (2)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基顯著抑制T淋巴細(xì)胞3H-胸腺嘧啶摻入率，隨著淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中條件培養(yǎng)基含量的增加，淋巴細(xì)胞3H-胸腺嘧啶摻入率逐步降低；制備條件培養(yǎng)基時(shí)添加

4、特異性抑制劑1-甲基色氨酸抑制IDO活性或者向條件培養(yǎng)基添加色氨酸至生理濃度均顯著減弱條件培養(yǎng)基對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用，淋巴細(xì)胞3H-胸腺嘧啶的摻入率得到部分恢復(fù)。 (3)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基顯著減少淋巴細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(TNF)α，并顯著增加淋巴細(xì)胞產(chǎn)生白介素(IL)-10。輔助T細(xì)胞1(Th1)/Th2比值即TNF-α/IL-10比值顯著降低。 (4)、根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)檢索人類(lèi)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)得到1869個(gè)肽段，對(duì)應(yīng)54

5、8個(gè)蛋白質(zhì)。經(jīng)GOA分類(lèi)分析，在總共548個(gè)蛋白質(zhì)中，細(xì)胞內(nèi)/膜蛋白質(zhì)285個(gè)，占52％；細(xì)胞外蛋白質(zhì)72個(gè)，占13％；細(xì)胞定位不明的蛋白質(zhì)127個(gè)，占23％；其它蛋白質(zhì)64個(gè)，占12％。 (5)、在總共72個(gè)細(xì)胞外蛋白質(zhì)中，血漿蛋白質(zhì)31個(gè)，占43％；細(xì)胞外基質(zhì)蛋白21個(gè)，占29％；滋養(yǎng)細(xì)胞源性蛋白質(zhì)7個(gè)，占10％；來(lái)源不明的蛋白質(zhì)13個(gè)，占18％。 (6)、10種蛋白質(zhì)對(duì)T淋巴細(xì)胞具有抑制作用：人絨毛膜促性腺激素、人

6、胎盤(pán)生乳素、妊娠特異性β1糖蛋白、甲胎蛋白、glycodelin、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2、thrombospondin-1、色素上皮衍生因子、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子和galectin-1。 結(jié)論： 滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物抑制T淋巴細(xì)胞增殖，增加T淋巴細(xì)胞IL-10產(chǎn)生，減少TNF-α產(chǎn)生，降低Th1/Th2比值。IDO介導(dǎo)的選擇性快速降解色氨酸是滋養(yǎng)細(xì)胞抑制T淋巴細(xì)胞增殖的機(jī)制之一。滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基是多種免疫調(diào)節(jié)物的混合體，其免疫抑制作