核心蛋白聚糖在腎小管間質(zhì)損害中的作用.pdf

1、腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial．fibrosis，TIF)是大多數(shù)終末期腎臟的共同病理特征。腎小球細(xì)胞外基質(zhì)沉積被認(rèn)為是進(jìn)展性腎小球疾病的首要特征。近年來認(rèn)識(shí)到，TIF及細(xì)胞外基質(zhì)沉積與腎功能進(jìn)行性下降最終導(dǎo)致腎功能衰竭有明顯的相關(guān)性。TIF是各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病持續(xù)發(fā)展，導(dǎo)致腎臟正常組織結(jié)構(gòu)被破壞并被細(xì)胞外基質(zhì)所取代，腎臟功能不可逆損害的病理過程。無論是腎小球疾病還是小管間質(zhì)性疾病及腎血管疾病

2、，腎功能的損害程度均與小管間質(zhì)病變的程度密切相關(guān)?？梢哉f，腎小管間質(zhì)病變程度是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一。TIF是由多種分子與多種靶細(xì)胞相互作用的復(fù)雜過程。其中，單核細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞外基質(zhì)的增生，腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及凋亡被認(rèn)為是影響腎臟纖維化病變的重要方面。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β<,1>(TGFβ<,1>)是被公認(rèn)的致纖維化因子之一。它通過多種途徑增加細(xì)胞外基質(zhì)的積聚，從而導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化。因此積極尋找能特異抑制TGFβ<,

3、1>過度表達(dá)或抑制其活性的物質(zhì)成為阻止小管間質(zhì)纖維化的重要研究之一。 核心蛋白聚糖(Decorin)是蛋白聚糖(PG)家族中的一員，由一條氨基端的糖胺聚糖鏈共價(jià)連接于核心蛋白部分所組成。近年研究顯示，Decorin的代謝異?；蚪Y(jié)構(gòu)改變與許多疾病的病理過程有密切關(guān)系。Decorin不僅能影響毛細(xì)血管的形成、細(xì)胞的存活、纖維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性及與細(xì)胞外基質(zhì)成分相互作用，Decorin還是TGFβ<,1>的天然拮抗劑。它通過多種方式影響細(xì)胞

4、因子、膠原、成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞等調(diào)節(jié)纖維化的進(jìn)程，從而在抑制腎臟纖維化，延緩腎臟疾病進(jìn)展中發(fā)揮作用。為了進(jìn)一步探討Decorin與TGFβ<,1>的關(guān)系，以及Decorin對(duì)TGFβ<,1>誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和膠原合成的影響，我們進(jìn)行了下面兩部分研究。 第一部分核心蛋白聚糖在腎組織中的表達(dá)和定位及與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子表達(dá)的關(guān)系 目的：觀察Decorin在腎臟病患兒腎活檢組織中的定位及表達(dá)，并探討其與腎小管間質(zhì)損害程度

5、及TGFβ<,1>之間的關(guān)系。 方法：收集36例腎臟疾病患兒腎活檢病理及臨床資料，根據(jù)腎小管間質(zhì)損害程度級(jí)別進(jìn)行分組，其中，輕度損傷組10例，中度損傷組13例和重度損傷組13例。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Decorin和TGFβ<,1>在腎小管間質(zhì)內(nèi)的定位及表達(dá)。 結(jié)果：Decorin主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞、腎間質(zhì)纖維化的部位及硬化的腎小球周圍包曼氏囊部位，隨著腎問質(zhì)損害程度的加重，Decorin的表達(dá)量逐漸增加。輕度損

6、傷組、中度損傷組和重度損傷組三組間有顯著性差異(P<0.05)。TGFβ<,1>的表達(dá)主要見于腎小管上皮細(xì)胞和腎間質(zhì)纖維化的部位，它的表達(dá)量也隨著腎小管間質(zhì)損害程度的加重而增加，三組間有顯著性差異(P<0.05)。Decorin和TGFβ<,1>兩者表達(dá)量呈正相關(guān)。 結(jié)論：(1)Decorin主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞、腎間質(zhì)纖維化的部位及硬化的腎小球周圍包曼氏囊部位，隨著腎間質(zhì)纖維化程度的加重，Decorin的表達(dá)量增加并與TG

7、Fβ<,1>的表達(dá)量呈正相關(guān)。 第二部分核心蛋白聚糖對(duì)TGFβ<,1>誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及膠原合成的影響 目的：探討Decorin對(duì)TGFβ<,1>誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化的影響；觀察Decorin對(duì)TGFβ<,1>誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響。 方法：將體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為6組：A朋性對(duì)照組；B.10ng/mlTGFβ<,1>組；C.10ng/ml Decorin

8、組；D.100ng/ml Decorin組；E.10ng/ml TGFβ<,1>+10ng/ml Decorin組；F.10ng/ml TGFβ<,1>+100ng/mlDecorin組。培養(yǎng)48h后，倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HK-2細(xì)胞內(nèi)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、波形蛋白、角蛋白、Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平的表達(dá)；應(yīng)用蛋白印跡技術(shù)(western-blot)和細(xì)胞免疫組化

9、方法觀察不同濃度的Decorin對(duì)HK-2細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白水平表達(dá)變化的影響。 結(jié)果：(1)A組、C組和D組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化，大部分細(xì)胞仍為橢圓形；A、C、D三組中，α-SMA、波形蛋白、角蛋白mRNA表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。B組 HK-2細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，大部分細(xì)胞拉長(zhǎng)呈梭形，波形蛋白、α-SMA mRNA表達(dá)明顯提高，角蛋白mRNA表達(dá)減少，與A組相比較有顯著性差異(P<0.05)。E組和F組，梭形樣細(xì)胞

10、明顯減少，尤其是F組梭形樣細(xì)胞減少更明顯，波形蛋白、α-SMA．mRNA表達(dá)有所下降，角蛋白mRNA表達(dá)呈上升趨勢(shì)，與B組相比較有顯著性差異(P<0.05)，其中E組和F組兩組間亦有顯著性差異(P<0.05)。(2)B組與A相比較，HK-2細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)量明顯增多；加入不同濃度的Decorin后，Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)與單獨(dú)TGFβ1組相比有不同程度的減少，且E組和F組相比較，兩組間差異顯著(P<0.