Hsc70下調(diào)劑-N-取代苦參酸類似物的設(shè)計(jì)、合成及抗HCV-HBV活性研究.pdf

1、我國(guó)傳統(tǒng)中藥單體苦參素（OMT，圖1）由于其良好的治療慢性乙型病毒性肝炎(HBV)療效，已在我國(guó)臨床運(yùn)用多年，其安全性也得到普遍認(rèn)可，但其抗HBV作用機(jī)制一直未見(jiàn)報(bào)道。我研究所蔣建東教授等以O(shè)MT為分子探針，首次發(fā)現(xiàn)并闡明了其抗HBV的作用機(jī)制(AAC，2010)：OMT通過(guò)下調(diào)肝細(xì)胞熱應(yīng)激同源蛋白70(Hsc70)的基因表達(dá)而達(dá)到抑制HBV復(fù)制的作用；同時(shí)還以O(shè)MT的類似物為探針，闡明了Hsc70也是抗丙型肝炎病毒(HCV)的靶點(diǎn)(H

2、epatology，2010)，該類似物能使Hsc70mRNA失穩(wěn)而下調(diào)肝細(xì)胞Hsc70蛋白的表達(dá)，明顯抑制HCVRNA的復(fù)制進(jìn)而發(fā)揮抗病毒作用。因此，以Hsc70為靶點(diǎn)的抗病毒化合物應(yīng)具有抗HBV/HCV的活性、以及安全性高的特點(diǎn)。
　　 本論文在上述工作基礎(chǔ)上以O(shè)MT為先導(dǎo)物，針對(duì)分子中的1-位N原子、5-位手性碳原子構(gòu)型、D環(huán)開(kāi)環(huán)后裸露的羧基及12-位N原子上的側(cè)鏈進(jìn)行較為系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)修飾與優(yōu)化，累積設(shè)計(jì)合成了89個(gè)N-取代

3、苦參酸類似物（其中85個(gè)為未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道），并通過(guò)下調(diào)Hsc70活性、抗HBV或者抗HCV活性評(píng)價(jià)，闡明了此類化合物的構(gòu)效關(guān)系(SAR),勾畫(huà)出構(gòu)效關(guān)系總圖?？偨Y(jié)SAR結(jié)果如下：
　　 1)1-位N上的氧原子對(duì)活性無(wú)顯著影響，不是活性必需；
　　 2)D環(huán)開(kāi)環(huán)后所得苦參酸仍保留活性，提示D環(huán)不是活性必需；
　　 3)苦參酸的羧基為活性必需基團(tuán)，當(dāng)羧基成酯或被還原成醇后活性下降；
　　 4)12-位引入合適的

4、取代芐基，特別芐基苯環(huán)上引入吸電子取代基可能使化合物抗HBV/HCV活性增加；當(dāng)12-芐基苯環(huán)被合適的雜環(huán)特別是4-吡啶環(huán)替換時(shí)，活性大大優(yōu)于先導(dǎo)物；芐基的CH2為活性必需基團(tuán)，當(dāng)其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)化合物抗HBV/HCV活性下降或消失；
　　 5)母核5-位C原子的S構(gòu)型為活性必需，當(dāng)其變?yōu)镽構(gòu)型時(shí)化合物抗HCV病毒活性下降，細(xì)胞毒性增加。
　　 所合成的89個(gè)化合物中，有51個(gè)類似物具有普遍的抗HBV/HCV活性，其中1

5、4個(gè)具有較好的活性；8個(gè)化合物（6b、6f、6h、6i、6n、6p、6s和14b）顯示出較高的治療指數(shù)，其抗HBV/HCV活性明顯優(yōu)于先導(dǎo)物OMT。
　　 急毒實(shí)驗(yàn)表明，小鼠體內(nèi)一次性腹腔注射給予各化合物時(shí)，化合物6f、6h和6i顯示出一定的毒性，而其余5個(gè)化合物（6b、6n、6p、6s和14b）的LD50＞1000mg/kg，具有很好的體內(nèi)安全性。小鼠體內(nèi)初步藥代實(shí)驗(yàn)表明5個(gè)活性化合物6b、6n、6p、6s和14b均具有很好的

6、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)：其達(dá)峰時(shí)間(Tmax)均為0.25-0.5h，藥時(shí)曲線下面積(AUC0-t)＞9000ng·h/mL，半衰期(t1/2)為1-2h，且口服生物利用度均＞70％。但計(jì)算機(jī)軟件（ADMETPredictor，SimulationsPlus公司）的ADME/T預(yù)測(cè)表明6n和6p具有潛在的致癌性和生殖毒性。因此選擇化合物6b、6s和14b進(jìn)行下一步研究。
　　 對(duì)活性化合物6b進(jìn)行的鴨乙肝病毒實(shí)驗(yàn)(DHBV)表明其具有良

7、好的體內(nèi)抗HBV活性，給藥劑量為75mg/kg/d時(shí)，能使鴨血清乙肝病毒DNA水平下降58%，與拉米夫定(50mg/kg/d，69%)相當(dāng)。
　　 對(duì)6b和6s的體外Hsc70下調(diào)活性研究表明，N-取代苦參酸類似物確是通過(guò)下調(diào)宿主Hsc70的表達(dá)而發(fā)揮抗病毒作用的。因此所得候選物6b、6s和14b與核苷類抗病毒藥物相比，具有廣譜(HBV/HCV)和不易誘導(dǎo)耐藥的特點(diǎn)。其中化合物6b和14b作為抗HCV候選物已完成企業(yè)轉(zhuǎn)讓，進(jìn)入臨