山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)細(xì)胞體外培養(yǎng)和表征.pdf

1、目的： 通過(guò)山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定，觀察關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨細(xì)胞的分離及體外擴(kuò)增的條件和體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性，研究其生物學(xué)特性及組織工程的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)；對(duì)關(guān)節(jié)盤(pán)進(jìn)行分區(qū)，定量計(jì)數(shù)各區(qū)中細(xì)胞數(shù)目，表征顥下頜關(guān)節(jié)盤(pán)中細(xì)胞的分型及分布，比較細(xì)胞體外培養(yǎng)后與原組織的差異，為顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)組織工程研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 1、無(wú)菌條件下切取1月齡山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)，剪碎后用Ⅱ型膠原酶消化14 h，過(guò)濾后獲得關(guān)節(jié)盤(pán)

2、纖維軟骨細(xì)胞。在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化及貼壁率，測(cè)定其生長(zhǎng)曲線，甲苯胺藍(lán)染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色鑒定，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 2、完整切取山羊雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)，按內(nèi)外側(cè)向及前后向分別等分為三部分和兩部分，將關(guān)節(jié)盤(pán)分為六份。標(biāo)記后用10％中性福爾馬林固定24 h，石蠟包埋后用組織學(xué)、免疫組化及電鏡技術(shù)檢測(cè)山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)。HE染色觀察關(guān)節(jié)盤(pán)各帶細(xì)胞類型及數(shù)目的不同，甲苯胺蘭染色、Ⅰ型膠原免疫組化檢測(cè)膠原的分布，透

3、射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 1、原代培養(yǎng)的關(guān)節(jié)盤(pán)纖維軟骨細(xì)胞4 h可觀察到貼壁細(xì)胞，6 h開(kāi)始伸展變形，24h基本全部貼壁，大部分細(xì)胞為圓三角形和多角形，小部分為長(zhǎng)梭形，第7天時(shí)細(xì)胞彼此相連，鋪滿瓶底，細(xì)胞以長(zhǎng)梭形為主，部分多角形。傳代后12h貼壁率達(dá)90％，大部分為多角形，5～6 d即可長(zhǎng)滿瓶底。甲苯胺藍(lán)染色和Ⅰ型膠原免疫組化染色結(jié)果陽(yáng)性。超微結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞內(nèi)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)。 2、顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)由不均分布

4、的細(xì)胞和膠原纖維組成。膠原幾乎都為Ⅰ型，膠原纖維一般表現(xiàn)為波浪形或卷曲狀，纖維大致平行，而細(xì)胞散在膠原纖維基質(zhì)中。細(xì)胞有成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞和軟骨細(xì)胞樣細(xì)胞兩種，其中前者占優(yōu)勢(shì)，兩者比例約為2.05:1。細(xì)胞類型和分布在各區(qū)沒(méi)有顯著性差異。電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞核大，梭形或不規(guī)則形，細(xì)胞器很少。軟骨細(xì)胞樣細(xì)胞胞核圓形或橢圓形，周?chē)须娮油干鋮^(qū)，細(xì)胞囊不明顯，偽足少見(jiàn)。 結(jié)論： 1、體外分離培養(yǎng)的山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤(pán)纖維