反義寡核苷酸聯(lián)合用藥的抗腫瘤研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展涉及到調(diào)控細(xì)胞增殖、衰老、凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)等多種基因的相互作用,所以多靶點(diǎn)進(jìn)攻腫瘤基因、多途徑用藥可能會(huì)更有效的治療疾病.該課題旨在研究多種基因靶向的反義寡核苷酸(ASODN)聯(lián)用以及反義寡核苷酸與化療藥物聯(lián)用對(duì)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用,初步建立了篩選、分析反義寡核苷酸藥物組合靶標(biāo)的實(shí)驗(yàn)方法及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法.第一部分反義寡核苷酸抗腫瘤組合藥靶的篩選主要圍繞以下幾方面進(jìn)行:選擇涉及細(xì)胞增殖、衰老、凋亡及信號(hào)傳導(dǎo)通路的重要基因靶標(biāo):IG

2、F-1R、hTERT、PKC-α、BCL-2及Survivin,以它們的mRNA為靶點(diǎn),設(shè)計(jì)、合成5種反義寡核苷酸;分別進(jìn)行兩藥組合及三藥組合,以脂質(zhì)體介導(dǎo)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,用MTT法染色并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率;通過(guò)析因設(shè)計(jì)、方差分析、金正均Q值法、聚類分析篩選出了組合作用較好的ASODN(hTERT)與ASODN(PKC-α)聯(lián)合用藥組及ASODN(IGF-1R)、ASODN(hTERT)與ASODN(PKC-α)聯(lián)合用藥組.第二部分反義寡核苷

3、酸抗腫瘤組合藥靶的作用機(jī)理研究是選擇細(xì)胞實(shí)驗(yàn)篩選出的"組合藥靶",通過(guò)Western Blot、RT-PCR實(shí)驗(yàn)及對(duì)分子相互作用通路的分析,提示IGF-1R位于PKC-α的上游、PKC-α位于hTERT的上游起正向調(diào)控作用.第三部分研究的是靶向人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT的反義寡核苷酸"癌泰得"分別與化療藥物順鉑、5-氟尿嘧啶、阿霉素聯(lián)用抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,用MTT法染色并計(jì)算聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率,通過(guò)對(duì)抑制率進(jìn)行方差分析、Q值

4、分析,可得出癌泰得與三種化療藥物聯(lián)用都有一定的協(xié)同作用,其中癌泰得與順鉑的協(xié)同作用最為明顯.對(duì)荷瘤裸鼠的實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證明了癌泰得與順鉑聯(lián)用可以起到抑制腫瘤生長(zhǎng)的增敏作用,同時(shí)聯(lián)合用藥并未增加對(duì)裸鼠的毒副作用.該研究提示:反義寡核苷酸聯(lián)合用藥可以抑制多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因,提高對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制效果;反義寡核苷酸與化療藥物聯(lián)用對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)也有明顯的增敏作用.該研究為進(jìn)一步篩選、分析反義寡核苷酸組合靶標(biāo)提供了一定的實(shí)驗(yàn)基