TNFSF4和TNFRSF4基因多態(tài)性與山東漢族人群冠狀動脈粥樣硬化疾病的相關性研究.pdf

1、[研究背景]：
　　 諸多研究表明冠狀動脈粥樣硬化心臟病是一種炎癥性疾病。在炎癥發(fā)生發(fā)展過程中，激活的CD4+及CD8+T細胞發(fā)揮著重要作用，而它們的激活需要各種信號通路的共刺激作用：其中除主刺激信號MHC-抗原肽及B7-CD28形成的雙信號通路途徑作用之外，輔助信號通路途徑也是T細胞激活過程中必不可少的條件之一。腫瘤壞死因子超家族成員(TNFSF)和腫瘤壞死因子受體超家族成員(TNPRSF)之間能夠形成T細胞激活所必須的各種輔

2、助信號通路，如CD40/CD40L，OX40/OX40L,4-1BB/4-1BBL,CD7O/CD27和TLIA/DR3等。
　　 通過多個人群中的關聯(lián)分析及基因差異表達研究表明，OX40/OX40L信號通路在冠狀動脈粥樣硬化心臟病的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。遺傳學研究及功能研究提示人類的TNFSF4基因(編碼OX40L)及TNFRSF4基因(編碼OX40)很可能作為重要的冠狀動脈粥樣硬化心臟病易感基因在疾病發(fā)生中起作用。由于

3、基因中多態(tài)位點與復雜疾病的關聯(lián)具有人群特異性，目前在山東漢族人群內尚未對TNFSF4基因及TNFRSF4基因多態(tài)位點與冠狀動脈粥樣硬化心臟病的相關性進行研究。
　　 [研究目的]：
　　 利用病例一對照關聯(lián)分析研究方法探討TNFSF4基因內的5個單核苷酸多態(tài)位點( SNPs)及TNFRSF4基因內的1個SNP與山東漢族人群冠狀動脈粥樣硬化心臟病之間的相關性，這些多態(tài)位點分別是：TNFSF4基因啟動子區(qū)域2個SNPsrs1

4、234314和rs45454293，第一內含子區(qū)域的2個tag SNPs rs3850641和rs1234313，第二內含子區(qū)域的1個tag SNP rs3861950；TNFRSF4基因第五內含子內的1個與功能位點rs2298211處于完美連鎖不平衡的代理SNP位點rs2298212。
　　 [研究方法]：
　　 1.病例組與對照組樣本收集：在山東漢族人群中收集冠狀動脈粥樣硬化心臟病患者及正常對照，抽取外周血并提取基因

5、組DNA。所收集的冠狀動脈粥樣硬化心臟病患者均符合冠狀動脈疾病的診斷標準，并行冠脈造影鑒定；正常對照均為漢族且無親緣關系、至少三代以內居住在山東的健康體檢人群的隨機個體，并通過病史、查體、心電圖和胸片排除器質性心臟病。
　　 2.基因分型，基因型及等位基因頻率統(tǒng)計：采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)(PCR-RFLP)的方法在病例組與對照組所有個體中對各個多態(tài)位點進行基因分型。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結果確定個體基因型，計算各位點

6、在病例組與對照組中的基因型頻率及等位基因頻率。
　　 3.Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗：根據(jù)Hardy-Weinberg平衡定律計算各多態(tài)位點在病例組和對照組中的預期基因型頻率，利用卡方檢驗比較觀察到的基因型頻率與預期基因型頻率間的差異，以PO.05則說明選取的病例組與對照組處于遺傳平衡狀態(tài)，具有群體代表性。
　　 4.基因型與等位基因分布差異檢測：利用卡方檢驗比較各

7、多態(tài)位點在病例組與對照組間的基因型頻率及等位基因頻率差異，以P　　 5

8、.病例組中冠脈受累分支分析：按照冠狀動脈受累支數(shù)對病例組進行分層，以Judkins方法行選擇性冠狀動脈造影，根據(jù)造影結果統(tǒng)計病變支數(shù)（左主干、前降支、回旋支、右冠狀動脈或其主要分支狹窄≥50％），分為1、2、3支病變；觀察不同受累支數(shù)之間基因型和等位基因頻率分布是否具有差異性。
　　 6.現(xiàn)有樣本的統(tǒng)計學效力檢驗：利用PGA軟件(Power for Genetic AssociationAnalysis，PGA)計算現(xiàn)有樣本能夠

9、提供的統(tǒng)計學效力，以避免由于II類錯誤引起的假陰性結果。
　　 [研究結果]
　　 1.TNFSF4基因rs1234314,rs45454293,rs3850641,rs1234313,rs3861950位點在山東漢族人群中具有多態(tài)性；五位點在病例組與對照組中均處于遺傳平衡狀態(tài)；基因型和等位基因頻率分布在病例組及對照組間的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。比較不同受累支數(shù)之間基因型與等位基因頻率分布發(fā)現(xiàn)，在冠脈受累各支

10、之間各位點基因型和等位基因頻率分布差異也無統(tǒng)計學意義。
　　 2.TNFRSF4基因rs2298212多態(tài)位點在山東漢族人群中具有多態(tài)性；在病例組與對照組中均處于遺傳平衡狀態(tài)；基因型和等位基因頻率分布在病例組與對照組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。比較不同受累支數(shù)之間基因型與等位基因頻率分布發(fā)現(xiàn)，在冠脈受累1支與3支之間，基因型及等位基因頻率分布方面均具顯著性差異（P<0.05）。
　　 3.應用PGA軟件，在檢驗水準a

11、=0.05，罕見等位基因頻率假定為0.17，OR假定為1.4，連鎖不平衡系數(shù)為1的假定條件下，現(xiàn)有樣本的統(tǒng)計效力超過了80％。
　　 [研究結論]
　　 1.TNFSF4基因rs1234314，rs45454293，rs3850641，rs1234313，rs3861950位點與山東漢族人群冠狀動脈粥樣硬化心臟病之間無相關性。該結果有待于利用更大的樣本和不同人群的病例對照研究來進行驗證。
　　 2.OX40基因r