肝再生磷酸酯酶-3在大腸癌轉(zhuǎn)移中作用的初步研究.pdf

1、目的：大腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。大腸癌患者早期常無(wú)明顯癥狀，有15％～35％就診時(shí)已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，而腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一。隨著對(duì)腫瘤在分子水平上的逐步深入研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)酪氨酸的磷酸化水平對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞周期等有重要的調(diào)節(jié)作用，與腫瘤有密切的關(guān)系。肝再生磷酸酶-3(PRL-3)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種非經(jīng)典的細(xì)胞內(nèi)酪氨酸磷酸酶，主要在心肌、骨骼肌和平滑肌中表達(dá)，目前對(duì)其功能了解甚

2、少。最近，Saha等利用基因表達(dá)系列分析的方法研究了大腸癌基因的表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)在正常大腸癌黏膜、良性腺瘤和大腸癌原發(fā)灶中PRL-3呈低表達(dá)，而在肝臟轉(zhuǎn)移灶中高表達(dá)，這些研究表明PRL-3有可能參與了大腸癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程。本研究從基因和蛋白水平分別檢測(cè)了PRL-3在正常大腸黏膜組織、大腸癌原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和肝轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析，以探討PRL-3與大腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法：1半定量RT-PCR法：采用RT-P

3、CR法在相同條件下擴(kuò)增所取各標(biāo)本中PRL-3mRNA和內(nèi)對(duì)照β-action的表達(dá)情況，測(cè)出PRL-3mRNA的表達(dá)水平(當(dāng)PRL-3mRNA和β-action的比值大于0.5時(shí)為高表達(dá)，小于0.5為低表達(dá))。然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2免疫組織化學(xué)法：采用SP法，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，用1：60稀釋的兔抗人PRL-3多克隆抗體分別檢測(cè)各標(biāo)本中PRL-3蛋白的表達(dá)情況，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)合臨床病理資料對(duì)其結(jié)果進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：在RT-PCR所檢測(cè)的30例大腸癌病人標(biāo)本中，PRL-3mRNA在正常大腸黏膜組織和非轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中表達(dá)率分別為16.7％(5/30)和12.5％(1/8)，且均為低表達(dá)；大腸癌原發(fā)灶中的表達(dá)率為26.7％(8/30)，其中25％(2/8)高表達(dá)；在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)率為59.1％(13/22)，其中61.5％(8/13)高表達(dá)；肝臟轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)率為83.3％(5/6)，且均為高表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，PRL-3mRN

5、A在正常大腸黏膜、大腸癌原發(fā)灶和非轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)之間的表達(dá)情況無(wú)明顯差異(P＞0.05)，而轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況明顯高于正常大腸黏膜、大腸癌原發(fā)灶和非轉(zhuǎn)移淋巴(P＜0.05)。 免疫組化結(jié)果顯示PRL-3蛋白在正常大腸黏膜、大腸癌原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及肝臟轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)率分別為20％(5/25)、30％(12/40)、62.5％(20/32)和75％(6/8)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，正常大腸黏膜與大腸癌原發(fā)灶間PRL-3蛋白的

6、表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移灶中PRL-3蛋白的表達(dá)水平顯著高于大腸癌原發(fā)灶及正常大腸黏膜(P＜0.05)。將大腸癌原發(fā)灶中PRL-3的表達(dá)情況與臨床病理資料結(jié)合進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)患者的性別、年齡及腫瘤的組織分型、分化程度和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與大腸癌原發(fā)灶中PRL-3的表達(dá)情況無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但標(biāo)本中Duke'sD期的PRL-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于其它期，即有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的大腸癌比無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的大腸癌PRL-3

7、蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率明顯升高(P＜0.05)。伴脈管瘤栓的大腸癌原發(fā)灶中PRL-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比不伴脈管瘤栓的大腸癌原發(fā)灶中顯著升高(P＜0.05)。 結(jié)論：1PRL-3的高表達(dá)多見(jiàn)于Duke'sD期大腸癌原發(fā)灶、大腸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移灶，提示PRL-3可能與大腸癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)，并有可能成為大腸癌肝臟轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物。 2PRL-3可能參與了大腸癌細(xì)胞向脈管系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移過(guò)程。 3大腸癌原發(fā)灶中PRL-3的表達(dá)與淋