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文檔簡介
1、淫羊藿仙茅是臨床常用的溫補(bǔ)腎陽的藥對。兩藥均為我國傳統(tǒng)中藥,2010版《中華人民共和國藥典》中均有收錄。淫羊藿和仙茅配伍相須為用,相得益彰。使補(bǔ)腎壯陽,強(qiáng)筋健骨,祛風(fēng)除濕功力增強(qiáng)。淫羊藿的抗骨質(zhì)疏松作用已有較多報(bào)道,其活性部位淫羊藿總黃酮和活性成分淫羊藿苷能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞活性,抑制破骨細(xì)胞活性,減少骨質(zhì)的丟失;能促進(jìn)下丘腦,海馬及骨組織中雌激素受體(ER)表達(dá)和增強(qiáng)骨組織護(hù)骨素(OPG)表達(dá)。仙茅作為補(bǔ)腎壯陽的藥物,具有確切的防治骨質(zhì)
2、疏松作用。仙茅能夠抑制骨吸收、降低去卵巢大鼠的骨丟失;仙茅苯甲酸酯類總酚苷能夠增加成骨細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶活性;仙茅苷降低破骨細(xì)胞的形成分化和抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。仙茅酚苷類成分具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫和植物雌激素等作用。
本實(shí)驗(yàn)在明確二仙湯對骨質(zhì)疏松確切防治作用的基礎(chǔ)上,對二仙湯內(nèi)君藥藥對淫羊藿仙茅抗骨質(zhì)疏松的配伍機(jī)制進(jìn)行了研究。主要包括:
一、基于蛋白組學(xué)研究淫羊藿苷防治骨質(zhì)疏松作用機(jī)理
3、淫羊藿苷對下丘腦-垂體-性腺(甲狀腺,腎上腺)軸靶器官(下丘腦,垂體,子宮,骨骼)的蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果顯示,差異蛋白功能與細(xì)胞凋亡,能量代謝,細(xì)胞骨架,蛋白質(zhì)聚集、折疊,分子伴侶,氧化應(yīng)激以及MAPK通路等相關(guān)。揭示淫羊藿苷多靶點(diǎn)、多途徑的作用機(jī)制。
二、淫羊藿仙茅藥對抗骨質(zhì)疏松活性成分篩選
本研究考察了淫羊藿苷、淫羊藿次苷、寶藿苷和朝藿定C、仙茅苷、仙茅素、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龍膽二糖苷的成骨細(xì)胞活性和破骨細(xì)
4、胞活性。主要內(nèi)容為對新生大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞成骨細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶(ALP)活性的影響;對新生大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞為模型,骨髓單核細(xì)胞經(jīng)1,25-(OH)2-VD3和地塞米松共同誘導(dǎo)而得到的破骨細(xì)胞進(jìn)行TRAP酶活性的影響;并觀察了對骨髓單核細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子M-SCF、RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的細(xì)胞線粒體膜電勢、細(xì)胞內(nèi)ATP含量及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的影響,篩選得出仙茅苷和淫羊藿苷的作用明顯。
三、淫羊藿總黃酮及仙茅苯甲酸酯
5、類總酚苷配伍防治骨質(zhì)疏松作用研究
本研究采用去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠模型(OVX),通過骨密度,骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué),血清、尿液骨相關(guān)生化指標(biāo)(Ca、P、Cr含量,ALP活性,孕激素含量),血清中氧化應(yīng)激相關(guān)酶活性(谷胱甘肽過氧化酶、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶)及丙二醛的含量)等指標(biāo)來考察淫羊藿總黃酮、仙茅苯甲酸酯類總酚苷以及配伍前后防治骨質(zhì)疏松的作用;通過觀察靶器官(子宮、陰道、乳腺)切片和考察這些中器官雌激素表達(dá)的變化,確定淫
6、羊藿總黃酮和仙茅苯甲酸酯類總酚苷以及配伍后有無顯著毒性作用。結(jié)果顯示,不論是有效性或安全性,配伍后均體現(xiàn)為相加作用。我們還通過代謝組學(xué)考察了OVX大鼠和給藥大鼠血漿及尿液中代謝產(chǎn)物變化,結(jié)果顯示,淫羊藿總黃酮組以及配伍組能顯著改善OVX導(dǎo)致的尿液和血液的代謝物變化這些顯著變化的代謝物仙茅苯甲酸酯類總酚苷主要與能量代謝、氨基酸代謝、氧化應(yīng)激和脂肪代謝相關(guān)。
四、淫羊藿苷和仙茅苷防治骨質(zhì)疏松配伍作用研究
根據(jù)蛋白
7、組研究結(jié)果,骨質(zhì)疏松參與調(diào)控能量代謝、細(xì)胞骨架形成。因此,我們觀察了淫羊藿苷和仙茅苷以及配伍對成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞作用線粒體膜電勢,ATP含量以及細(xì)胞骨架的作用。結(jié)果顯示,成骨細(xì)胞活性包括(增殖、ALP活性,骨結(jié)節(jié))體現(xiàn)相加關(guān)系,破骨細(xì)胞活性(破骨細(xì)胞數(shù)目,TRAP活性,CK活性)體現(xiàn)顯著的協(xié)同作用。依據(jù)骨質(zhì)疏松發(fā)生的原理,進(jìn)一步考察了淫羊藿苷和仙茅苷以及配伍對破骨細(xì)胞MAPK通路及OPG/RANKL通路的影響。結(jié)果顯示顯著的協(xié)同作用。<
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