淫羊藿苷誘導ES細胞體外定向分化為心肌細胞的差異蛋白質(zhì)組學及其相關(guān)機制研究.pdf

1、浙江大學藥學院碩士學位論文淫羊藿苷誘導ES細胞體外定向分化為心肌細胞的差異蛋白質(zhì)組學及其相關(guān)機制研究姓名：李歡申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：朱丹雁20100101浙江人學碩lj學位論文中文摘要Es細胞體外定向分化為心肌細胞過程的研究，可深入探索心肌分化每一階段特征性基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物蛋白質(zhì)的表達及其功能模式，闡明胚胎心臟早期發(fā)生與分化的生命現(xiàn)象本質(zhì)，這對探索干細胞的分化機制和應(yīng)用有重大意義。泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitinpro

2、teasomesystem，UPS)參與體內(nèi)許多生命活動，如細胞循環(huán)和分裂、分化和發(fā)育、神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)建成、細胞表面受體或離子通道的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)數(shù)量控制等。UPS是體內(nèi)降解蛋白的重要途徑，其作用機理為：1)泛素通過共價結(jié)合來標記靶標蛋白；2)蛋白酶體對標記蛋白進行降解。c末端泛素水解酶1(UbiquitinCterminalHydrolaseL1，UCHL1)的主要作用是將完成任務(wù)的泛素蛋白結(jié)合體水解，從而得到泛素單體并重復利用，使體內(nèi)

3、泛素濃度保持在一定水平，可以認為泛素和UCHL1的表達呈正相關(guān)。有文獻表明，泛素可促進Es細胞分化，而阻斷蛋白酶體的活性則可使只有在Es細胞分化早期階段才會活化的基因區(qū)域啟動轉(zhuǎn)錄，說明蛋白酶體對Es細胞的分化有一定抑制作用。另有研究顯示核因子1cB(nuclearfactorrB，NFrB)啟動能促進Es細胞分化，而對蛋白酶體活性阻斷會導致NFrB的作用活性受到抑制，說明蛋白酶體對Es細胞的分化有促進作用。由此可見，UPS在Es細胞分化

4、過程中是一把雙刃劍。UCHL1在神經(jīng)祖細胞的分化過程中起到極其重要的促進作用。所以，我們推測，UPS系統(tǒng)在Es細胞分化為心肌細胞的過程中同樣起著不可忽視的作用。本課題組前期研究已經(jīng)證實淫羊藿苷(icariin，ICA)介入后顯著提高Es細胞體外定向分化為心肌細胞的分化率，并使分化時相顯著提前，且有良好的量效和時效關(guān)系。并初步探索了ICA能促進心肌發(fā)育依賴性基因(如BMP2、GATA4、NKx25、0cMHC、MLC2v和DAR)和心肌特

5、異性肌小節(jié)蛋白(如0【actinin和troponinT)的表達增加，并在時相上呈先后順序。這提示ICA誘導心肌分化與發(fā)育依賴性基因表達上調(diào)密切相關(guān)。但僅從基因的角度來研究還遠遠不夠，必須研究由基因轉(zhuǎn)錄和翻譯出蛋白質(zhì)的過程，才能真正揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)和規(guī)律。目前針對Es細胞定向分化為心肌細胞，尤其是藥物誘導分化的蛋白質(zhì)組學尚未見報道。若能構(gòu)建藥物誘導心肌細胞分化的蛋白質(zhì)差異表達圖譜，可深入探索心肌分化每一階段特征性基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物蛋白質(zhì)的表