基質(zhì)金屬蛋白酶在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及其調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、第一部分:MT1-MMP在SiO2作用的巨噬細(xì)胞的中表達(dá)的研究 目的:觀察SiO2刺激下的巨噬細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)膜型基質(zhì)金屬蛋白酶Ⅰ(MT1-MMP)表達(dá)的變化。 方法:取小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)并以SiO2刺激，倒置顯微鏡下觀察作用不同的時(shí)間點(diǎn)巨噬細(xì)胞形態(tài)的變化，用RT-PCR及weternblot方法分別檢測(cè)SiO2作用0h、2h、6h、12h、18h、24h時(shí)巨噬細(xì)胞MT1-MMPmRNA及蛋白表達(dá)的變化。

2、 結(jié)論:SiO2可上調(diào)AM內(nèi)MT1-MMPmRNA及蛋白的表達(dá)，可能由此影響細(xì)胞外基質(zhì)的代謝最終導(dǎo)致纖維化的形成。 第二部分:EGR-1在SiO2刺激的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生MT1-MMP中的作用的研究 目的:探討SiO2刺激巨噬細(xì)胞生成膜型基質(zhì)金屬蛋白酶Ⅰ(MT1-MMP)增多的分子機(jī)制及核轉(zhuǎn)錄因子早期反應(yīng)生長(zhǎng)因子1(Egr-1)介導(dǎo)的信號(hào)通路在其中的重要作用。 方法:以Egr-1抗體及Egr-1靶向性寡核苷酸(ODN

3、)圈套策略(decoystrategy)分別處理SiO2刺激的巨噬細(xì)胞后，用RT-PCR和westernblot的方法分別檢測(cè)細(xì)胞中MT1-MMPmRNA及MT1-MMP蛋白的表達(dá)。 結(jié)論:MT1-MMP在SiO2刺激的巨噬細(xì)胞中表達(dá)明顯增加，它可能在矽肺的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用，Egr-1作為其重要的轉(zhuǎn)錄因子參與了對(duì)MT1-MMP基因表達(dá)的調(diào)控。Egr-1抗體和Egr-1"decoy"ODN的應(yīng)用可能會(huì)在一定程度上抑制M

4、T1-MMP的表達(dá)及活性從而延緩矽肺的進(jìn)展。 第三部分:己酮可可堿對(duì)肺纖維化大鼠MMP-2和TIMP-1的表達(dá)的影響 目的:觀察己酮可可堿對(duì)博來霉素致肺纖維化大鼠MMP-2和TIMP-1表達(dá)的影響，初步探討其抗肺纖維化的作用機(jī)制。 方法:SD大鼠30只，隨機(jī)分為模型組、治療組和空白組。模型組和治療組氣管內(nèi)注射博來霉素誘導(dǎo)成肺纖維化，空白組在相同條件下給予生理鹽水。第二天起治療組大鼠腹腔給予己酮可可堿6mg/kg.d