iNOS抑制劑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞株作用的探討.pdf

1、已有研究發(fā)現(xiàn)NO及iNOS在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，如乳腺癌，胃癌，卵巢癌，黑色素瘤，宮頸癌等。NO和iNOS的表達(dá)程度與腫瘤的分化，轉(zhuǎn)移，浸潤(rùn)能力成正相關(guān)。國(guó)內(nèi)外有較多的研究發(fā)現(xiàn)抑制iNOS合成NO，可以在多個(gè)方面抑制腫瘤的發(fā)展。目前有較多的NOS抑制劑被研制開發(fā)出來，并且他們的作用已經(jīng)得到肯定。1400W是具有高選擇性的iNOS抑制劑之一。對(duì)iNOS的選擇性較eNOS高出5000倍，較nNOS高出200倍。研究發(fā)現(xiàn)1400W主要通過

2、與精氨酸特異性競(jìng)爭(zhēng)iNOS精氨酸結(jié)合位點(diǎn)而發(fā)揮作用。但是迄今為止，對(duì)于NO,iNOS及其抑制劑對(duì)宮頸癌的作用研究較少，因此本課題利用宮頸癌宮頸癌Hela細(xì)胞株，研究iNOS在宮頸癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況，觀察iNOS抑制劑單獨(dú)和聯(lián)合順鉑對(duì)Hela細(xì)胞的作用，希望為宮頸癌的綜合治療提供理論基礎(chǔ)。 一.宮頸癌Hela細(xì)胞中iNOS的表達(dá) 目的：了解iNOS在宮頸癌Hela細(xì)胞中表達(dá)情況。 方法：宮頸癌Hela細(xì)胞株復(fù)蘇后

3、培養(yǎng)，采用免疫組化法檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞中iNOS的表達(dá)情況，應(yīng)用 western blot方法檢測(cè)細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：免疫組化法發(fā)現(xiàn)iNOS在宮頸癌Hela細(xì)胞中呈陽性表達(dá)，主要位于細(xì)胞漿內(nèi)，部分位于細(xì)胞胞膜上。Western blot結(jié)果也提示宮頸癌Hela細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)陽性，分子量為130kb。 二.iNOS抑制劑1400W及順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響 目的：了解1400W

4、，順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響。 方法：應(yīng)用MTT檢測(cè)1400W和順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，其中順鉑濃度取0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，4mg/ml，8mg/ml，1400W濃度取20umol/L,40umol/L,分別觀察24hr,48hr,72hr。 結(jié)果：1400W和順鉑均能抑制宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)，其抑制作用與劑量相關(guān)，但未呈現(xiàn)時(shí)效關(guān)系。 三.iNOS抑制劑1400W及

5、順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡的影響 目的：了解1400W及順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡的影響。 方法：培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞，分為對(duì)照組(培液)，順鉑組(順鉑4ug/ml)，1400W組(1400W40umol/L)和順鉑+1400W(順鉑4ug/ml+1400W 40umol/L)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞經(jīng)作用24hr,48hr和72hr后凋亡情況。 結(jié)果：對(duì)照組，順鉑組，1400W組，順鉑+14

6、00W組中，24hr后宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡率分別為(2.53±0.81)％，(9.00±0.40)％，(1.94±0.21)％和(15.75±1.69)％；48hr后宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡率分別為(5.65±0.00)％，(11.12±1.38)％，(4.09±0.52)％和(45.70±2.11)％；72hr后宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡率分別為(4.42±0.04)％，(25.30±0.22)％，(4.92±0.87)％和(60.

7、34±0.98)％。其中順鉑組與對(duì)照組比較p<0.05，1400W組與對(duì)照組比較p>0.05，1400W聯(lián)合順鉑組與對(duì)照組比較P值<0.05，與順鉑組比較P值<0.05。 四.iNOS抑制劑1400W及順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)的影響 目的：了解1400W及順鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)的影響。 方法：培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，分為對(duì)照組(培液)，順鉑組(順鉑4ug/ml)，1400W組(1

8、400W40umol/L)和順鉑+1400W(順鉑4ug/ml+1400W 40umol/L)，采用RT-PCR檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞經(jīng)作用24hr,48hr和72hr后iNOSmRNA表達(dá)情況。 結(jié)果：在對(duì)照組，順鉑組，1400W組，和順鉑+1400W組，作用24hr后宮頸癌Hela細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)量分別為0.72±0.15，0.58±0.04，0.65±0.20和0.34±0.12；作用48hr后宮頸癌Hela細(xì)胞i

9、NOSmRNA表達(dá)量分別為0.98±0.25，0.47±0.02，0.70+0.36和0.31±0.08；作用72hr后宮頸癌Hela細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)量分別為0.72±0.05，0.40±0.06，0.62±0.12和0.17±0.05。其中順鉑與對(duì)照組比較p<0.05，1400W與對(duì)照組比較p>0.05，1400W聯(lián)合順鉑與對(duì)照組比較P值<0。05，與順鉑組比較P值<0.05。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，iNOS在宮頸癌H