超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率的研究.pdf

1、第一部分超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染的最優(yōu)參數(shù)選擇 目的：探討超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞的最優(yōu)轉(zhuǎn)染參數(shù)。 方法：采用形態(tài)學(xué)觀察Hela細(xì)胞生長情況；用MTT比色法檢測(cè)不同超聲條件對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖抑制率，由此初篩出的超聲條件介導(dǎo)P53轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，最終確定超聲微泡的最優(yōu)參數(shù)。 結(jié)果： 1.超聲輻照時(shí)間30s，強(qiáng)度0.5、0.75、1W/c㎡時(shí)，細(xì)胞存活率分

2、別為（81.19±2.00）％、（77.61±1.93）％、（61.97±1.86）％；超聲輻照強(qiáng)度0.5 W/c㎡，時(shí)間10s、30s、60s時(shí)，細(xì)胞存活率分別為（84.75±0.75）％、（81.19±2.00）％、（69.56±0.32）％。其增殖抑制作用有明顯的時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系。 2.將初篩出的超聲條件介導(dǎo)轉(zhuǎn)染，其中超聲輻照時(shí)間30 s，強(qiáng)度0.5 W/c㎡處理組的Hela細(xì)胞表達(dá)較多綠色熒光，轉(zhuǎn)染率7.1％，而其

3、余組的熒光表達(dá)相對(duì)較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：超聲微泡對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞有增殖抑制作用；超聲輻照時(shí)間30s，強(qiáng)度0.5 W/c㎡時(shí)，超聲微泡可最大限度促進(jìn)P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞。 第二部分超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率的研究 目的：探討優(yōu)化的超聲微泡介導(dǎo)P53轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。 方法：以第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即超聲強(qiáng)度0.5 W/c㎡，連續(xù)輻照時(shí)間30s進(jìn)行體

4、外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞的P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)分為5組，即空白對(duì)照組、質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡+超聲組，用RT-PCR分析各組轉(zhuǎn)染情況。 結(jié)果：RT-PCR顯示質(zhì)粒+微泡+超聲組可見較亮的電泳條帶，超聲+質(zhì)粒組有微弱的條帶可見，前者的P53/β-actin光密度比值較后者大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余組未檢測(cè)到目的基因的表達(dá)。 結(jié)論：在優(yōu)化的條件下，超聲聯(lián)合微泡可促進(jìn)野生型P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)