SHP-1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、本文主要從以下三個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 SHP-1在鼻咽癌細(xì)胞株中的mRNA和蛋白表達(dá)水平測(cè)定
　　目的：檢測(cè)蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶SHP-1在鼻咽癌細(xì)胞株中表達(dá)情況。
　　方法：通過PCR、Western檢測(cè)不同分化程度的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、CNE-2及5-8F中SHP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：5-8F和CNE-1中SHP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平較高，CNE-2中SHP-1的mRNA

2、和蛋白表達(dá)水平較低，其中5-8F與CNE2、CNE-1與CNE-2的mRNA和蛋白水平差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），5-8F與CNE-1中的mRNA和蛋白水平差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：SHP-1在5-8F和CNE-1中mRNA和蛋白表達(dá)水平較高，在CNE-2的mRNA和蛋白水平表達(dá)較低。
　　第二部分 SHP-1下調(diào)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的：SHP-1SiRNA轉(zhuǎn)染高表達(dá)SH

3、P-1的5-8F細(xì)胞，探討SHP-1下調(diào)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：SHP-1SiRNA經(jīng)脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染高表達(dá)SHP-1的5-8F細(xì)胞，通過PCR、Western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況，MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞凋亡及周期情況，Transwell侵襲小室模型測(cè)定細(xì)胞體外侵襲能力。
　　結(jié)果：SHP-1S

4、iRNA轉(zhuǎn)染高表達(dá)SHP-1的5-8F細(xì)胞,PCR、Western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的5-8F細(xì)胞相比SiNeg組和Control組SHP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下降（P＜0.05）；MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染后5-8F細(xì)胞增殖加快（P＜0.05）；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的5-8F細(xì)胞相比SiNeg和Control組細(xì)胞凋亡無明顯變化，三組間凋亡率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的5-8F細(xì)胞G1期明顯減少（P＜0.05），S期變化不

5、明顯（P＞0.05），G2/M期明顯增加（P＜0.05）；Transwell侵襲小室檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的5-8F細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng)（P＜0.05），而SiNeg組細(xì)胞與Control細(xì)胞侵襲能力無明顯差別（P＞0.05）。
　　結(jié)論：SHP-1表達(dá)降低促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，侵襲能力增強(qiáng)。
　　第三部分SHP-1上調(diào)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制探討
　　目的：SHP-1過表達(dá)慢病毒載體感染低表達(dá)S

6、HP-1的CNE-2細(xì)胞，探討SHP-1上調(diào)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制。
　　方法：SHP-1過表達(dá)慢病毒載體感染低表達(dá)的CNE-2細(xì)胞，通過PCR、Western-blot檢測(cè)感染前后細(xì)胞SHP-1的mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況，MTT檢測(cè)感染前后細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)感染前后細(xì)胞凋亡及周期情況，Transwell侵襲小室模型測(cè)定細(xì)胞體外侵襲能力，Western檢測(cè) SHP-1下游基因磷酸化的stat3的表達(dá)情況

7、。
　　結(jié)果：SHP-1過表達(dá)慢病毒載體感染低表達(dá)SHP-1的CNE-2細(xì)胞，PCR、Western-blot檢測(cè)感染后的細(xì)胞SHP-1表達(dá)明顯升高（P＜0.05），MTT檢測(cè)感染后CNE-2細(xì)胞細(xì)胞增殖受到抑制（P＜0.05）；流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組細(xì)胞凋亡率無明顯變化，差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；流式細(xì)胞儀檢測(cè)感染后細(xì)胞G1期明顯減少（P＜0.05），S期明顯增多（P＜0.05），G2/M期變化不明顯（P＞0.05），細(xì)胞周期阻滯在S期

8、；Transwell侵襲小室檢測(cè)感染后CNE-2細(xì)胞的侵襲能力減弱（P＜0.05），而NC組細(xì)胞與Control細(xì)胞侵襲能力無明顯差別（P＞0.05）。為探討SHP-1影響鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制，選取高表達(dá)SHP-1的感染后的CNE-2細(xì)胞，其p-stat3表達(dá)水平相比NC組細(xì)胞與Control細(xì)胞明顯下降（P＜0.05），這可能與SHP-1使p-stat3去磷酸化有關(guān)，進(jìn)而抑制stat3通路引起細(xì)胞一系列上述生物學(xué)變化。