Stathmin表達沉默鼻咽癌細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)特性初探.pdf

1、目的:構(gòu)建stathmin-siRNA重組質(zhì)粒表達載體,建立stathmin表達沉默鼻咽癌5-8F細(xì)胞株,探討stathmin沉默對鼻咽癌5-8F細(xì)胞的增殖、周期和成瘤性的影響,為鼻咽癌的基因治療提供實驗依據(jù)。
　　方法:(1)合成stathmin特異性siRNA片段,片段插入pGenesil-1.1質(zhì)粒表達載體構(gòu)建重組質(zhì)粒表達載體。(2)重組質(zhì)粒表達載體轉(zhuǎn)染,RT-PCR和Western blotting鑒定,建立stathmi

2、n穩(wěn)定抑制表達5-8F細(xì)胞株。(3) MTT實驗分析細(xì)胞的增殖,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞的周期。(4)裸鼠移植瘤實驗分析腫瘤細(xì)胞的成瘤性。
　　結(jié)果:(1)獲得了stathmin siRNA pGenesil-1.1重組質(zhì)粒表達載體和stathmin沉默的鼻咽癌5-8F細(xì)胞株。(2)Stathmin沉默5-8F細(xì)胞株孵育48、72和96 h,細(xì)胞增殖抑制率分別為(33.67±2.52)％,(28.33±1.15)%,(31.67±1.5

3、3)%,與陰性對照組分別為(8.13±0.60)%,(3.20±0.53)%,(3.97±0.15)%和空白對照組(0)比較,差異有顯著性(p<0.01)。(3) Stathmin沉默組G2期細(xì)胞為(15.8±0.55)%,與陰性對照組(11.3±0.79)%和空白對照組(10.9±0.92)%比較,差異有顯著性(P<0.05)。(4)Stathmin沉默組,裸鼠移植瘤重量為(0.32±0.21)g,與陰性對照組(1.10±0.40)