2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分
   目的:體外實(shí)驗(yàn)研究LXA4對(duì)人肝癌細(xì)胞epithelial-mesenchymal transition、凋亡、增殖、遷移、血管新生的影響及其機(jī)制;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建H22荷瘤小鼠模型,研究LXA4類似物BML-111對(duì)原發(fā)瘤增殖,血管新生,炎細(xì)胞浸潤(rùn),侵襲及轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制。
   方法:采用脂多糖和激活巨噬細(xì)胞上清液分別體外模擬炎癥微環(huán)境模型,分別通過(guò)HE 染色,免疫熒光,western blotti

2、ng 及RT-PCR檢測(cè)LXA4對(duì)HepG2細(xì)胞EMT轉(zhuǎn)變的影響;通過(guò)Hoechst染色、免疫熒光和流式細(xì)胞檢測(cè)LXA4對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響;MTT、RT-PCR和western blotting觀察LXA4對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制;傷口愈合實(shí)驗(yàn)觀察LXA4 對(duì)HepG2細(xì)胞遷移的影響;ELISA法檢測(cè)LXA4對(duì)HepG2細(xì)胞上清液中內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察BML-111對(duì)H22荷瘤小鼠原發(fā)瘤細(xì)胞

3、侵襲,血管新生,凋亡,增殖,炎細(xì)胞浸潤(rùn)及腫瘤轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制。
   結(jié)果:
   1.LXA4能有效抑制LPS誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變。HE形態(tài)觀察,LPS刺激后,細(xì)胞排列松散,加入LXA4干預(yù)后,細(xì)胞恢復(fù)上皮細(xì)胞的緊密連接。
   2.LXA4促進(jìn)HepG2的細(xì)胞凋亡。LPS刺激后,HepG2細(xì)胞凋亡減少,Bcl-2表達(dá)增強(qiáng),而加入LXA4干預(yù)后,HepG2細(xì)胞凋亡明顯增多,同時(shí)Bcl-2表達(dá)減弱。

4、流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn),50nM的LXA4能有效促進(jìn)HepG2細(xì)胞凋亡。
   3.LXA4能有效抑制LPS誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的增殖。MTT 結(jié)果顯示100,200,400nM的LXA4均能有效抑制LPS誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的增殖。我們同時(shí)檢測(cè)了增殖指標(biāo)核仁素(C23)和調(diào)控蛋白核干素(nucleostemin,NS)的表達(dá)變化。免疫熒光、RT-PCR和western blotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)LXA4能有效抑制C23和NS的

5、表達(dá),并且呈濃度依賴。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn),LXA4能夠通過(guò)抑制NF-κBp65來(lái)調(diào)控增殖。SiRNA沉默LX受體(FPRL1)后,LXA4抗增殖作用消失。
   4.臨床標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn),與癌旁正常組織相比,肝癌組織內(nèi)有更多的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),說(shuō)明巨噬細(xì)胞參與了肝癌的演進(jìn)過(guò)程。我們還發(fā)現(xiàn)肝癌組織內(nèi)表達(dá)更多的VEGF。
   5.LXA4 能有效抑制ACM誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的增殖。MTT結(jié)果顯示,ACM能有效促進(jìn)HepG2細(xì)

6、胞增殖,而LXA4能抑制其誘導(dǎo)的增殖。RT-PCR,westernblotting和免疫熒光結(jié)果顯示LXA4能抑制ACM誘導(dǎo)的C23和NS的表達(dá)上調(diào),并能抑制NF-κBp65的轉(zhuǎn)位,抑制IκBα的降解。JNK特異性阻斷劑SP600125能減弱LXA4的作用。
   6.LXA4能有效抑制LPS或ACM誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的遷移增加及VEGF 增高。
   LPS或者ACM能加快HepG2細(xì)胞的遷移,而LXA4能抑制遷移。

7、LPS顯著提高了VEGF表達(dá)水平,VEGF表達(dá)水平從1023.4pg/ml上升至1285.0 pg/ml(P<0.05),200nM和400nM LXA4能分別降低其表達(dá)水平至748.5和547.5pg/ml(P<0.05)。U937/ACM使VEGF水平從對(duì)照組的578.7pg/ml上升至745.6pg/ml(P<0.05),而加入LXA4后,VEGF降低至547.5pg/ml,與U937/ACM 相比明顯降低(P<0.05)。

8、>   7.LXA4 能抑制ACM 誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞發(fā)生EMT 轉(zhuǎn)變。HE 染色發(fā)現(xiàn),四種不同來(lái)源(包括U937,THP-1,RAW264.7和PBMCs)的ACM 均能促進(jìn)HepG2 發(fā)生EMT 轉(zhuǎn)變,而LXA4 能有效抑制其誘導(dǎo)的EMT 轉(zhuǎn)變。
   8.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中BML-111對(duì)H22荷瘤小鼠原發(fā)瘤及肺轉(zhuǎn)移的抑制作用。PBS組,腫瘤組織與其周邊組織邊界不清楚,包膜不完整,腫瘤組織侵犯脂肪組織;而BML-111組,腫瘤

9、組織與其周邊組織邊界非常清楚,包膜完整。PBS組,腫瘤內(nèi)血管豐富,不見壞死;而BML-111組,腫瘤內(nèi)血管稀少,伴有壞死。
   TUNEL染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),BML-111處理后,腫瘤細(xì)胞凋亡明顯增加。PBS組,NS的表達(dá)主要位于腫瘤內(nèi)部;而BML-111組,腫瘤組織沒有表達(dá),NS表達(dá)在腫瘤組織和周圍正常組織交界的部位。另外,BML-111組表達(dá)VEGF水平較低。我們以CD68和CD45分別作為巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞的標(biāo)記物,與PBS組相

10、比,BML-111組兩種細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少。在肺組織內(nèi),我們發(fā)現(xiàn)PBS組肺內(nèi)出現(xiàn)明顯轉(zhuǎn)移瘤,轉(zhuǎn)移瘤在肺內(nèi)呈結(jié)節(jié)樣分布。高倍鏡下觀察,腫瘤異型性明顯,且與原發(fā)瘤具有共同特征。而BML-111組,肺野清晰,無(wú)轉(zhuǎn)移瘤。
   9.LXA4抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)中,免疫熒光結(jié)果發(fā)現(xiàn),LXA4能有效抑制LPS誘導(dǎo)的OPN表達(dá)上調(diào),RT-PCR結(jié)果顯示LXA4的這種作用能被ERK特異性阻斷劑,PD98059阻斷。LXA4同時(shí)也下調(diào)MM

11、P9的表達(dá)。Westernblotting結(jié)果顯示,50,100,200和400nM的LXA4均能增加E-cadherin的表達(dá),下調(diào)Vimentin的表達(dá),并下調(diào)P53的表達(dá)。但是50nM LXA4抑制P53的作用最強(qiáng),而200nM LXA4對(duì)E-cadherin和Vimentin的調(diào)節(jié)作用最強(qiáng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn),BML-111能下調(diào)原發(fā)瘤內(nèi)骨橋蛋白(osteopontin,OPN)和P53的表達(dá),而上調(diào)E-cadherin的表達(dá)

12、。
   結(jié)論:
   1.LXA4能有效抑制LPS誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生的EMT轉(zhuǎn)變,Boc-2能夠減弱這種效應(yīng);
   2.LXA4促進(jìn)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡;
   3.LXA44 通過(guò)NF-κB和JNK通路抑制ACM誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞增殖;
   5.LXA4有效抑制ACM誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生的EMT轉(zhuǎn)變;
   6.LXA4能抑制LPS或ACM誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞遷移加快和V

13、EGF表達(dá)增多;
   7.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,BML-111抑制H22荷瘤小鼠原發(fā)瘤中肝癌細(xì)胞的增殖,血管新生,侵襲和炎細(xì)胞浸潤(rùn),并促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡;
   8.LXA4和BML-111可能是通過(guò)ERK通路下調(diào)OPN,P53和MMP9,上調(diào)E-cadherin發(fā)揮其抗腫瘤轉(zhuǎn)移效應(yīng)。
   第二部分
   目的:研究LXA4在調(diào)控LPS誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞Nrf2和下游二期酶中的作用及其機(jī)制,同時(shí)也研究LXA4是

14、否能提高HepG2細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。
   方法:臨床標(biāo)本檢測(cè)Nrf2及其二期解毒酶和抗氧化酶在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察BML-111是否能抑制H22荷瘤小鼠腫瘤組織內(nèi)Nrf2的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)觀察LXA4對(duì)Nrf2的轉(zhuǎn)位,二期酶的表達(dá),ROS的產(chǎn)生,GPx和MnSOD的活性的影響。RNA干擾實(shí)驗(yàn)觀察LXA4對(duì)Nrf2的調(diào)控是否為受體依賴。聯(lián)合運(yùn)用長(zhǎng)春新堿(Vincristine,VCR)和LXA4用來(lái)觀

15、察LXA4是否能提高對(duì)化療的敏感性。
   結(jié)果:
   1.與癌旁組織相比,肝癌組織內(nèi)Nrf2及二期解毒酶和抗氧化酶表達(dá)明顯增高。
   2.BML-111抑制了H22荷瘤小鼠原發(fā)瘤組織中Nrf2的表達(dá)。BML-111處理小鼠后,Nrf2的表達(dá)(陽(yáng)性表達(dá)率為69.07%±0.07)明顯低于PBS組(陽(yáng)性表達(dá)率為8.44%±0.03)。
   3.LXA4通過(guò)其受體FPRL1及抑制ERK下調(diào)LPS誘導(dǎo)的H

16、epG2細(xì)胞Nrf2及其二期酶表達(dá)增高。
   4.LXA4抑制LPS誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞Nrf2核轉(zhuǎn)位。
   5.LXA4抑制SOD和GPx的活性。LXA4能夠明顯下調(diào)SOD和GPx的活性,而PD98059能減弱這種效應(yīng)。
   6.LXA4增加了ROS的產(chǎn)生。LXA4能夠增加HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,而LPS能夠下調(diào)ROS,并且PD98059能夠減弱LXA4的效應(yīng)。
   7.LXA4增加HepG

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