兒童急性白血病ALK基因及NPM-ALK融合基因的研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　 近幾年,越來越多的研究者認識到人類惡性腫瘤遺傳學(xué)改變的重要性,對惡性腫瘤遺傳學(xué)改變的研究能夠在基因水平上解釋腫瘤的發(fā)病機制,更有利于相關(guān)惡性腫瘤的診斷,針對遺傳學(xué)異常的靶向治療給腫瘤患者帶來更多長期生存的機會。目前,在急性白血病中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多遺傳學(xué)改變,包括基因缺失、基因突變、基因擴增及基因易位等各個方面,已經(jīng)可以在基因水平了解一部分急性白血病致病原因,由此產(chǎn)生的基因靶向治療如RAN干擾技術(shù)等已經(jīng)得到了

2、明顯的治療效果。
　　 間變性淋巴瘤激酶(ALK)基因是重要的腫瘤相關(guān)基因,在許多惡性腫瘤中存在ALK基因的異常,包括間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)、非小細胞型肺癌(NSCLC)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、炎性肌纖維母細胞瘤(IMT)及神經(jīng)母細胞瘤(NB)等,ALK基因異常引起的細胞增殖過度和凋亡下調(diào)是其主要致瘤原因。核仁磷酸蛋白(NPM)基因是一種研究較多的具有癌基因及抑癌基因雙重生物學(xué)功能的基因,參與許多惡性腫瘤的

3、形成,包括膀胱癌、乳腺癌、肺癌和淋巴瘤等實體瘤,也包括急性髓系白血病(AML)和骨髓增生異常綜合征(MDS)這兩個血液系統(tǒng)惡性腫瘤,最近,研究者們更加關(guān)注NPM基因?qū)毙园籽〉挠绊?。NPM基因異常導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的原因與其自身的生物學(xué)特性密切相關(guān),包括參與核糖體組裝和運輸、分子伴侶功能及調(diào)節(jié)重要的抑癌因子的特點。在ALCL中最常見的嵌合體基因是NPM-ALK融合基因,當(dāng)前,研究者們基本明確了NPM-ALK融合基因引起ALCL主要原因,NP

4、M-ALK融合基因檢測已經(jīng)應(yīng)用在ALCL的診斷及預(yù)后判斷上,針對NPM-ALK融合基因及融合蛋白的靶向治療也得到了預(yù)想的成果。
　　 目前,國外僅有報道顯示在極少數(shù)急性粒單核細胞白血病(AML-M4)中存在ALK基因易位,尚無關(guān)于ALK基因在其他類型兒童急性白血病中表達情況的報道,NPM-ALK融合基因在血液系統(tǒng)腫瘤中的表達也僅在淋巴瘤中發(fā)現(xiàn),本研究旨在檢測急性白血病、淋巴瘤白血病患兒中ALK基因、NPM-ALK融合基因表達情況

5、,探討ALK基因、NPM-ALK融合基因在急性白血病發(fā)病中是否發(fā)揮作用。
　　 研究方法:
　　 1、收集2008年9月～2010年5月在鄭州大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科血液病區(qū)初診為急性白血病患兒的骨髓液,包括急性淋巴細胞白血病、急性髓系細胞白血病和淋巴瘤白血病。正常對照組為兒童正常骨髓液。
　　 2、采用逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測ALK基因及NPM-ALK融合基因,實驗步驟:骨髓液的采集、骨髓液的處

6、理、總RNA的提取、cDNA的合成及PCR試驗。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS17.0 for Windows軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理,實驗RT-PCR產(chǎn)物陽性樣本總數(shù)用例數(shù)(n)表示,實驗組與正常對照組的比較采用獨立兩組二分類定性資料的卡方檢驗(x2),統(tǒng)計檢驗標(biāo)準(zhǔn)均為雙側(cè)概率檢驗(α=0.05),P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、實驗組檢測結(jié)果:
　　 (1)急性T細胞淋

7、巴細胞白血病組結(jié)果顯示,ALK基因及NPM-ALK融合基因表達均為陰性。
　　 (2)急性B細胞淋巴細胞白血病組結(jié)果顯示,ALK基因及NPM-ALK融合基因表達均為陰性。
　　 (3)急性髓系白血病組結(jié)果顯示,ALK基因及NPM-ALK融合基因表達均為陰性。
　　 (4)淋巴瘤白血病組結(jié)果顯示,ALK基因及NPM-ALK融合基因表達均為陰性。
　　 2、正常對照組檢測結(jié)果顯示ALK基因及NPM-ALK融合

8、基因表達均為陰性。
　　 結(jié)論:
　　 1、本實驗未發(fā)現(xiàn)兒童急性白血病中存在ALK基因及NPM-ALK融合基因的表達,ALK基因及NPM-ALK基因可能僅是ALCL、DLBCL的特異性基因,在急性白血病中不發(fā)揮致瘤作用。
　　 2、鑒于以往研究已經(jīng)證實,ALK基因及NPM-ALK融合基因在大部分間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)和彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)中表達,因此檢測ALK基因、NPM-ALK融合基因?qū)τ?/p>