IFP35在慢性髓系白血病細(xì)胞中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、目的:慢性髓細(xì)胞性白血病(Chronic Myelognous Leukemia,CML)是一種起源于骨髓多能造血干細(xì)胞的惡性增殖性疾病;干擾素-α(interferon-α,IFN-α)是治療CML的最有效制劑之一,但部分CML患者在經(jīng)過IFN-α的治療后出現(xiàn)耐受。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)經(jīng)IFN-α誘導(dǎo)后其IFN-α敏感株KT-1/A3細(xì)胞中高表達(dá)IFP35蛋白,然而IFN-α耐藥株KT-1/A3R細(xì)胞此蛋白表達(dá)量較低。IFP35(Inte

2、rferon-induced Protein35)是干擾素誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白質(zhì)。通過研究在經(jīng)IFN-α處理后CML細(xì)胞株中的分子表達(dá),探討IFP35蛋白質(zhì)參與IFN-α誘導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)過程。
　　 方法:本課題以對(duì)IFN-α治療效應(yīng)呈現(xiàn)不同敏感性的2種CML細(xì)胞株:KT-1/A3、KT-1/A3R細(xì)胞為研究對(duì)象,以RT-PCR和Westemblotting檢測(cè)這些CML細(xì)胞經(jīng)IFN-α處理前、后的IFP35分子表達(dá)水平的差異;在上述發(fā)

3、現(xiàn)的基礎(chǔ)上構(gòu)建pcDNA3.1-IFP35重組表達(dá)載體,并將載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入KT-1/A3和KT-1/A3R細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)分析兩種細(xì)胞在轉(zhuǎn)染和IFN-α處理后的細(xì)胞生長狀況,繪制生長曲線。
　　 結(jié)果:RT-PCR結(jié)果表明在KT-1/A3和KT-1/A3R細(xì)胞系中IFP35的mRNA表達(dá)量隨IFN-α的誘導(dǎo)時(shí)間增加而增大。在RT-PCR結(jié)果的基礎(chǔ)上,利用Western blotting檢測(cè)IFP35蛋白質(zhì)在IFN-α誘導(dǎo)48h后KT

4、-1/A3細(xì)胞的表達(dá)水平高于KT-1/A3R細(xì)胞(p＜O.01);細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IFP35的KT-1/A3和KT-1/A3R細(xì)胞系中,IFP35重組載體的表達(dá)明顯降低KT-1/A3和KT-1/A3R細(xì)胞的IFN-α敏感性(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:IFP35 mRNA表達(dá)水平隨IFN-α誘導(dǎo)時(shí)間增加而增加,在48h的IFN-α誘導(dǎo)下在KT-1/A3中IFP35蛋白質(zhì)表達(dá)水平高于KT-1/A3R細(xì)胞系;成功構(gòu)建pcDN