安徽省臨床分離真菌的耐藥性分析及耐唑類藥物白念珠菌ERG11基因的突變研究.pdf

1、目的：
　　了解安徽地區(qū)2008～2012年臨床分離的464株真菌感染的種類和耐藥性特點,為臨床合理使用抗真菌藥物提供依據(jù)。
　　研究安徽省臨床分離的對唑類藥物(氟康唑﹑伊曲康唑﹑伏立康唑)耐藥白念珠菌的ERG11基因突變情況,初步探討其與耐藥形成的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　菌株來源
　　464株真菌臨床分離株(已排除同一患者相同部位重復(fù)分離出的菌株)來自安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)測中心2008年~2012年9月

2、份收集的監(jiān)測網(wǎng)所屬40家醫(yī)院(由皖南、皖中、皖北不同級別的醫(yī)院組成)住院和門診患者的各類臨床標(biāo)本。質(zhì)控菌株為近平滑念珠菌ATCC22019,由安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)控中心保存。
　　方法：
　　1.采用沙保弱培養(yǎng)基對收集的464株真菌進(jìn)行培養(yǎng)﹑分離,科瑪嘉顯色培養(yǎng)基進(jìn)行鑒定,采用微量稀釋法測定其對唑類抗真菌藥物的敏感性。
　　2.將鑒定為對唑類藥物耐藥的白念珠菌菌株及3株隨意挑選的敏感菌株接種于SDA培養(yǎng)基進(jìn)行分離、培養(yǎng),提

3、取篩選出耐藥的菌株及3株敏感株的基因組DNA。
　　3.設(shè)計引物擴(kuò)增其ERG11基因,擴(kuò)增后送之測序,測序結(jié)果與GenBank中的已知標(biāo)準(zhǔn)序列(X13296)進(jìn)行比對分析,檢測是否出現(xiàn)基因突變位點。
　　結(jié)果：
　　1.464株臨床分離真菌菌株中,以白色念珠菌為主,占69.0％,其次是光滑念珠菌,占16.8%;分離的真菌對兩性霉素B和5-氟胞嘧啶的敏感率較高,而對伊曲康唑和氟康唑的敏感率相對較低。
　　2.耐藥的

4、菌株及3株敏感株ERG11基因的PCR產(chǎn)物電泳后均成功獲得預(yù)期大小的片段(1641 bp)。
　　3.測序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列X13296比對分析后,發(fā)現(xiàn)34個不同的堿基突變位點,其中錯義突變位點為14個。
　　結(jié)論：
　　1.安徽地區(qū)臨床分離的真菌對唑類抗真菌藥物已出現(xiàn)了不同程度的耐藥性,應(yīng)加強(qiáng)真菌耐藥性的監(jiān)測,另外臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理使用抗真菌藥物,以提高臨床治愈率。
　　2.研究發(fā)現(xiàn)耐唑類藥物的白念珠菌ER