基于OATP1B1-OATP1B3介導的五種二代磺酰脲類降糖藥的轉(zhuǎn)運及其與瑞舒伐他汀相互作用研究.pdf

1、背景：
　　Ⅱ型糖尿病是一類由于胰島素分泌相對不足或胰島素功能抵抗而引發(fā)的血糖異常升高的代謝性疾病，服用降糖藥是控制血糖的主要方式之一。第二代磺酰脲類降糖藥(sulfonylureas，SUs)是目前應(yīng)用最早、品種最多、臨床應(yīng)用最廣泛的口服降糖藥。由于患者在患糖尿病的同時往往伴有肥胖、高血脂等其他疾病的發(fā)生，臨床上常與他汀類藥物聯(lián)合使用以控制病情，這無疑增加了藥物發(fā)生相互作用的風險。引起藥物相互作用的原因有很多，其中基于轉(zhuǎn)運體介導

2、的相互作用是其重要機制之一。因此，研究第二代磺酰脲類降糖藥與肝臟轉(zhuǎn)運體OATP1B1、OATP1B3之間的關(guān)聯(lián)性及其與他汀類藥物間可能發(fā)生的藥物相互作用機制對臨床合理用藥有著重要的科學意義。
　　目的：
　　通過構(gòu)建穩(wěn)定高表達OATP1B1、OATP1B3的HEK293T細胞模型，研究五種常見第二代磺酰脲類降糖藥（格列本脲、格列齊特、格列美脲、格列吡嗪、格列喹酮）經(jīng)轉(zhuǎn)運體轉(zhuǎn)運的藥代動力學特征，初步推斷其與OATP1B1、OA

3、TP1B3之間的關(guān)聯(lián)性。分別加入OATP1B1、OATP1B3的抑制劑，觀察加藥前后降糖藥攝取量的變化，進一步確認OATP1B1、OATP1B3與第二代磺酰脲類降糖藥之間的關(guān)系，并在此基礎(chǔ)上研究其與他汀類調(diào)血脂藥瑞舒伐他汀之間的相互作用及其機制，為臨床合理用藥提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.建立可以同時測定五種SUs的LC-MS檢測方法，采用乙酸乙酯萃取法處理細胞樣品，檢測細胞破碎液中降糖藥的濃度。
　　2.用丁酸

4、鈉作用于OATP1B1-HEK293T、OATP1B3-HEK293T細胞，誘導OATP1B1與OATP1B3基因的高表達，并通過瑞舒伐他汀攝取實驗驗證誘導模型是否成功。
　　3.探究五種SUs對HEK293T細胞毒性，在此基礎(chǔ)上分別研究五種SUs在OATP1B1-HEK293T、OATP1B3-HEK293T細胞中的轉(zhuǎn)運及其動力學特征，計算Km、Vmax等動力學參數(shù)，并將其與陽性對照藥瑞舒伐他汀比較，初步推斷這五種SUs與轉(zhuǎn)運體

5、OATP1B1、OATP1B3的關(guān)聯(lián)性；分別選取其中經(jīng)OATP1B1、OATP1B3介導轉(zhuǎn)運的SUs，比較加用OATP1B1抑制劑四溴酚酞磺酸鈉、利福平和OATP1B3抑制劑甘草酸、利福平后SUs攝取量的變化，進一步深入闡明SUs的轉(zhuǎn)運機制。
　　4.選用他汀類調(diào)血脂藥瑞舒伐他汀，將其與SUs聯(lián)用，比較聯(lián)合用藥與單獨用藥時細胞內(nèi)藥物濃度的變化，進一步確認SUs與他汀類調(diào)血脂藥之間可能的藥物相互作用機制。
　　結(jié)果：
　

6、　1.建立的LC-MS檢測方法專屬性好，靈敏度較高，精密度與準確度均符合相關(guān)規(guī)定。
　　2. OATP1B1-HEK293T、OATP1B3-HEK293T細胞經(jīng)丁酸鈉誘導后，其對各自相應(yīng)底物瑞舒伐他汀的攝取量明顯增加，表明誘導模型構(gòu)建成功。
　　3. OATP1B1-HEK293T細胞對格列齊特、格列美脲有明顯的攝取，其Km、Vmax分別為30.18μΜ、12.91nmol.min-1.mg-1 protein和10.02

7、μΜ、61.71nmol. min-1. mg-1 protein，而 OATP1B1底物瑞舒伐他汀的Km、Vmax分別為34.54μΜ、16.68nmol.min-1.mg-1 protein。OATP1B1抑制劑四溴酚酞磺酸鈉、利福平能抑制格列齊特、格列美脲的攝取，IC50值分別為313.05μΜ、466.82μΜ和852.25μΜ、3.94mM。另外，格列齊特、格列美脲與OATP1B1底物瑞舒伐他汀之間存在一定程度相互作用：當?shù)孜?/p>

8、為瑞舒伐他汀時，格列齊特、格列美脲明顯抑制其轉(zhuǎn)運（IC50為146.70μΜ和76.25μΜ）；反之，瑞舒伐他汀亦會對格列齊特、格列美脲產(chǎn)生一定程度抑制作用（IC50分別為222.36μΜ和517.35μΜ）。
　　4. OATP1B3-HEK293T細胞對格列本脲、格列吡嗪有明顯的攝取，其Km、Vmax分別為15.36μΜ、120.00nmol. min-1.mg-1 protein和41.29μΜ、41.98 nmol.min

9、-1.mg-1 protein。而OATP1B3-HEK293T細胞攝取瑞舒伐他汀的Km、Vmax為35.21μΜ、16.67nmol.min-1.mg-1 protein。加入OATP1B3抑制劑甘草酸、利福平后，格列本脲、格列吡嗪的攝取受到抑制，IC50值分別為262.63μΜ、53.51μΜ和123.90μΜ、50.08μΜ。另外，當以瑞舒伐他汀為底物時，格列本脲、格列吡嗪攝取被抑制（IC50分別為99.94μΜ和898.90μΜ

10、）；同樣，當?shù)孜餅楦窳斜倦濉⒏窳羞拎簳r，瑞舒伐他汀亦抑制其攝?。↖C50為1.52mM和189.76μΜ)。
　　結(jié)論：
　　1.本實驗建立的LC-MS檢測方法簡便靈敏，可用同時檢測五種常見第二代磺酰脲類降糖藥的濃度。
　　2.格列齊特、格列美脲是OATP1B1的底物。其中，格列美脲結(jié)合OATP1B1能力強于OATP1B1底物瑞舒伐他汀，格列齊特與OATP1B1的結(jié)合能力和瑞舒伐他汀相當。OATP1B1抑制劑四溴酚酞磺

11、酸鈉、利福平對格列齊特、格列美脲的攝取有抑制作用。當格列齊特、格列美脲分別與他汀類調(diào)血脂藥瑞舒伐他汀合用時，它們之間可能會發(fā)生競爭性抑制。
　　3.格列本脲、格列吡嗪是OATP1B3的底物。其中，格列吡嗪結(jié)合OATP1B3的能力略強于OATP1B3底物瑞舒伐他汀，格列本脲與OATP1B3的結(jié)合力相對更強。OATP1B3抑制劑利福平對二者的攝取均表現(xiàn)出較強的抑制作用，而抑制劑甘草酸的抑制作用則相對較弱。當格列本脲、格列吡嗪分別與他汀