芥子氣損傷體內(nèi)診斷生物標(biāo)志物檢測技術(shù)的研究——芥子氣—DNA加合物.pdf

1、芥子氣是一種糜爛性毒劑，首次使用于第一次世界大戰(zhàn)，在兩伊戰(zhàn)爭中也曾被使用。據(jù)估計一戰(zhàn)中芥子氣的傷亡率約占化學(xué)損傷傷亡率的80％，因此被稱為“毒劑之王”。由于其生產(chǎn)容易，易于儲備，時至今日，芥子氣的現(xiàn)實威脅依然存在。 芥子氣的中毒機(jī)理十分復(fù)雜。它是一種雙功能烴化劑，在體內(nèi)迅速與親核基團(tuán)核酸、蛋白質(zhì)及谷胱甘肽等發(fā)生反應(yīng)。芥子氣的毒性作用機(jī)理目前還未完全闡明，但DNA的烴化反應(yīng)被認(rèn)為是主要的作用。 芥子氣損傷體內(nèi)診斷生物標(biāo)志物

2、檢測技術(shù)的研究一直是人們關(guān)注的課題，由于芥子氣的毒性通常認(rèn)為是其對DNA的烴化作用引起，因此芥子氣-DNA加合物可以作為芥子氣損傷的生物標(biāo)志物。本課題旨在通過現(xiàn)代儀器分析技術(shù)建立體內(nèi)芥子氣-DNA加合物的檢測方法，以便為芥子氣損傷及中毒救治提供可靠依據(jù)，為防護(hù)醫(yī)學(xué)的研究提供有力工具。 首先我們對HETEG標(biāo)準(zhǔn)品的合成進(jìn)行了研究，探討了合成的最佳反應(yīng)條件，采用柱層析純化產(chǎn)物。合成的HETEG純度＞98％，產(chǎn)率為17.8％，其紫外光

3、譜、質(zhì)譜及1H-NMR譜與結(jié)構(gòu)及文獻(xiàn)報道一致。 其次建立了中毒DNA樣品及全血樣品中HETEG的HPLC、LC-MS檢測方法。探討了樣品預(yù)處理實驗條件，通過正交試驗確定酸水解最佳條件為磷酸水解，pH3.5，100℃，1hr。而酶水解與酸水解效率相當(dāng)，因此選用成本低、時間短的酸水解。樣品預(yù)處理方法滿足實驗要求，可檢測到暴露于0.1mmol/L芥子氣濃度的DNA中HETEG及0.5mmol/L芥子氣濃度的全血中HETEG。考察了標(biāo)準(zhǔn)