劑量密集新輔助化療與RNAi下調(diào)hTERT基因在乳腺癌中作用的研究.pdf

1、研究背景：新輔助化療(NAC)作為局部進(jìn)展期乳腺癌(LABC)的標(biāo)準(zhǔn)治療方案已經(jīng)得到廣泛接受，新輔助化療后獲得病理完全緩解(pCR)的乳腺癌病人的長(zhǎng)期生存率可以得到顯著改善。因此，如何提高新輔助化療的療效和在新輔助化療前預(yù)測(cè)新輔助化療療效成為了LABC治療的研究重點(diǎn)。RNA干擾(RNAi)是新的基因阻斷技術(shù)，siRNA在轉(zhuǎn)錄后水平使靶基因沉默，在基因治療方面顯示巨大的前景。 研究目的：為提高LABC新輔助化療的療效，采用表阿霉素

2、加紫杉醇雙周方案劑量密集新輔助化療，觀察其療效、毒副反應(yīng)及病理組織學(xué)改變。為探尋能預(yù)測(cè)新輔助化療療效的有效指標(biāo)，并且證實(shí)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)有無(wú)預(yù)測(cè)新輔助化療療效的作用，比較新輔助化療前hTERT的表達(dá)與新輔助化療前病人臨床病理特征的相關(guān)性以及二者與新輔助化療療效之間的相互關(guān)系，對(duì)比新輔助化療前后hTERT表達(dá)變化及其與療效問(wèn)的關(guān)系，為如何在新輔助化療前預(yù)測(cè)其療效提供了依據(jù)。為進(jìn)一步提高乳腺癌的治療效果，采用RNAi基因敲除技術(shù)

3、，敲除或下調(diào)hTERT基因的表達(dá)，探討基因治療在乳腺癌治療中作用。 材料與方法：將2002年5月至2006年1月，41例未經(jīng)治療的的IIb期至IIIb期的LABC病人入組。劑量密集新輔助化療方案為表阿霉素40-50mg／m2，d1，靜注；紫杉醇150—175m/m2，d2，靜滴3h，以上藥物按次序給予，每2周重復(fù)1次，每2周為1個(gè)療程，均接受2個(gè)療程的治療。收集在新輔助化療前用14G空芯針對(duì)乳腺癌腫瘤原發(fā)灶進(jìn)行穿刺活檢獲取的標(biāo)本

4、和新輔助化療后所有病人均行乳腺癌根治術(shù)后所獲取的標(biāo)本，用免疫組化和RT-PCR的方法檢測(cè)其hTERT的mRNA和蛋白表達(dá)：將新輔助化療前臨床病理學(xué)指標(biāo)、新輔助化療2個(gè)療程后評(píng)估的療效以及上述檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。另外，依據(jù)RNAi原理，使用RNAi—DNA載體技術(shù)，構(gòu)建靶向hTERT基因的siRNA，轉(zhuǎn)導(dǎo)入乳腺癌MCF一7細(xì)胞，在瘤細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)RNAi，采用細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)、RT-PCR法、Western-blot等技術(shù)檢測(cè)siRNA處理前后

5、瘤細(xì)胞增殖及hTERT基因表達(dá)。 研究結(jié)果： 第一部分結(jié)果：①表阿霉素加紫杉醇劑量密集新輔助化療對(duì)4l例LABC病人的治療中，腫瘤原發(fā)灶總有效率85．4％，其中臨床完全緩解(cCR)19．5％(8／41)，部分緩解(PR)65．9％(27／41)，pCRl2．2％(5／41)。②新輔助化療前后病理學(xué)改變有明顯差異，新輔助化療后腫瘤細(xì)胞大多出現(xiàn)退行性改變，可見(jiàn)細(xì)胞核固縮，碎裂和細(xì)胞壞死等以及有明顯的間質(zhì)水腫，可見(jiàn)多量慢性炎

6、癥細(xì)胞浸潤(rùn)，程度不等的纖維組織增生膠原化。③主要的毒副反應(yīng)為血液系統(tǒng)毒性，白細(xì)胞下降、中性粒細(xì)胞減少癥主要出現(xiàn)在III、IV度反應(yīng)中，分別為63．4％和70．7％，且9．8％的病人出現(xiàn)白細(xì)胞減少性發(fā)熱，但在G-CSF的支持下和預(yù)防使用抗生素等，所有病人均能夠完成新輔助化療計(jì)劃。 第二部分結(jié)果：①新輔助化療前癌組織中hTERTmRNA和蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為73．1％、80．5％，沒(méi)有顯著性差異，呈顯著正相關(guān)，且與臨床病理學(xué)參數(shù)沒(méi)

7、有相關(guān)性。②新輔助化療前腫瘤最大徑小于5cm的T2期腫瘤達(dá)到cCR的比例顯著高于大于5cm的T3和T4期的病人；但不同腫瘤大小發(fā)生pCR的幾率是一致的。不同臨床分期發(fā)生cCR和pCR的幾率沒(méi)有顯著性差異。hTERTmRNA及蛋白陽(yáng)性表達(dá)的病人發(fā)生cCR和pCR的幾率顯著性低于hTERTmRNA及蛋白陰性表達(dá)的病人。③新輔助化療前臨床病理學(xué)參數(shù)、hTERT的表達(dá)與cCR或pCR均沒(méi)有獨(dú)立的相關(guān)關(guān)系。④新輔助化療前hTERTmRNA和蛋白陽(yáng)

8、性表達(dá)率分別73．2％、80．5％顯著高于新輔助化療后其陽(yáng)性表達(dá)率29．3％、36．6％。 第三部分結(jié)果：①成功構(gòu)建hTERT-pGenesil—siRNA重組質(zhì)粒。②乳腺癌MCF．7細(xì)胞經(jīng)hTERT-pGenesil-siRNA處理后，hTERT的mRNA和蛋白表達(dá)分別下調(diào)了61．7％、52．8％，且對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)平均增殖抑制率達(dá)61．4％，與對(duì)照N-pGenesil—siRNA處理組有顯著性差異。 結(jié)論：

9、①表阿霉素加紫杉醇雙周方案劑量密集新輔助化療在LABC的治療中療效顯著，其毒副反應(yīng)的耐受性良好，故有可能作為L(zhǎng)ABC新輔助化療的一線化療方案。②hTERT與乳腺癌發(fā)生密切相關(guān)，說(shuō)明了hTERT在激活端粒酶的活性和促使腫瘤細(xì)胞增殖中起了重要作用。③hTERT的高陽(yáng)性表達(dá)病人達(dá)到cCR和pCR較低，可能是由于hTERT高表達(dá)促使腫瘤細(xì)胞增殖導(dǎo)致惡性程度增高所致。④腫瘤大小、hTERTmRNA和蛋白表達(dá)與新輔助化療后的cCR沒(méi)有獨(dú)立的相關(guān)關(guān)系