長脈沖胃電刺激對(duì)糖尿病大鼠胃動(dòng)力的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分糖尿病大鼠胃動(dòng)力及胃竇ICC的改變
　　目的：以糖尿病大鼠為研究對(duì)象，觀察糖尿病狀態(tài)下胃動(dòng)力和胃竇ICC的改變。
　　方法：雄性Sprague Dawley（SD）大鼠20只，隨機(jī)分為兩組，糖尿病組（DM group，n=10）采用60mg/kg鏈脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射成功建立糖尿病模型；其余10只為正常對(duì)照組（normal control group，n=10）。分別于造模前、成模后、成模后第2周、4周和

2、6周記錄兩組大鼠的血糖和體重。成模后第6周末，應(yīng)用酚紅餐灌胃法檢測胃排空及器官浴槽技術(shù)檢測胃竇環(huán)形肌收縮能力來判斷兩組大鼠胃動(dòng)力的改變情況；應(yīng)用免疫組化、RT-PCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)技術(shù)評(píng)估胃竇c-kit的表達(dá)情況；應(yīng)用透射電鏡仔細(xì)觀察ICC超微結(jié)構(gòu)損傷情況。
　　結(jié)果：（1）造模前兩組大鼠血糖水平?jīng)]有明顯地差異；成模后及成模后第2周、4周和6周，糖尿病組大鼠血糖水平與正常組相比顯著升高；（2）造模前兩組大鼠體重亦

3、沒有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周和6周，糖尿病組大鼠體重較同期正常組相比都有明顯下降；（3）糖尿病組大鼠胃排空率較正常組相比發(fā)生明顯延遲（0.57±0.06％vs0.73±0.02%，P=0.018）；（4）在選擇性破壞ICC前后，糖尿病組肌條收縮能力均較正常組的明顯減弱；（5）RT-PCR顯示糖尿病組大鼠胃竇c-kit mRNA的表達(dá)量相對(duì)于正常組明顯降低（0.024±0.001 vs1.000±0.095，P=0.000）；

4、（6）免疫印跡法實(shí)驗(yàn)顯示胃竇c-kit蛋白表達(dá)量在糖尿病組較正常組相比顯著降低；（7）正常組胃竇 c-k it陽性細(xì)胞主要分布在肌間層，肌內(nèi)層以及黏膜下層，而糖尿病組各層次c-kit陽性細(xì)胞表達(dá)均明顯減少；（8）糖尿病組ICC超微結(jié)構(gòu)較正常組顯示細(xì)胞器顯著減少，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹。
　　結(jié)論：糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯胃排空延遲，胃竇收縮力減弱，并且伴隨有ICC的缺失和損傷。
　　第二部分糖尿病大鼠胃竇SCF/c-kit通路及S

5、MC的改變
　　目的：以糖尿病胃輕癱大鼠為動(dòng)物模型，研究在糖尿病狀態(tài)下 SCF/c-kit信號(hào)通路及SMC的改變。
　　方法：應(yīng)用免疫印跡法檢測胃竇SCF、a-SMA、mysion11蛋白表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR檢測SCF、a-SMA mRNA表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)a-SMA與c-kit同時(shí)定位平滑肌細(xì)胞與ICC細(xì)胞的表達(dá)；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察SMC超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果：（1）Western blot結(jié)果顯示，糖

6、尿病組大鼠胃竇的SCF蛋白表達(dá)量較正常組相比顯著降低，但糖尿病組胃竇的a-SMA表達(dá)較正常組未見明顯改變，而mysion11則較正常組表達(dá)出現(xiàn)顯著降低；（2）RT-PCR結(jié)果顯示，糖尿病組大鼠胃竇SCF mRNA的表達(dá)量相對(duì)于正常組明顯降低，而a-SMA mRNA的表達(dá)量則較正常組未見明顯改變；（3）免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在正常組c-kit+細(xì)胞夾雜在a-SMA+細(xì)胞之間，肌間層與肌內(nèi)層有較多 ICC分布，而糖尿病組 a-SMA+細(xì)胞未出

7、現(xiàn)較明顯改變，c-kit+細(xì)胞則明顯減少；（4）正常對(duì)照組SMC整體呈梭形，其細(xì)胞核則為長橢圓形，胞核內(nèi)的異染色質(zhì)分布相對(duì)較為均勻，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯可見豐富的密斑、密體，肌絲亦清晰可見，可見線粒體較多分布其中。糖尿病組的SMC排列較為紊亂，細(xì)胞核較為不規(guī)則，染色質(zhì)呈致密塊狀，染色較深，胞內(nèi)可見有許多較大的胞質(zhì)溶解性空泡，密斑及密體、肌絲同時(shí)都明顯減少，線粒體異常腫脹、呈空泡樣變、甚至溶解。
　　結(jié)論：糖尿病時(shí)SCF/c-kit信號(hào)通路